【摘 要】
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乳酸菌是人和动物消化道内重要的益生菌,是公认的安全级(GRAS)微生物,因其佐剂效应和免疫调节功能等特点,以乳酸菌做为活疫苗载体表达外源蛋白研制口服疫苗,具有重要的意义和
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乳酸菌是人和动物消化道内重要的益生菌,是公认的安全级(GRAS)微生物,因其佐剂效应和免疫调节功能等特点,以乳酸菌做为活疫苗载体表达外源蛋白研制口服疫苗,具有重要的意义和应用前景。实验目的:构建重组IBDV-VP2活载体乳酸菌疫苗菌,为乳酸菌活载体疫苗搭建技术平台和前期理论支持。实验方法:本研究利用乳酸球菌NZ3900作为抗原递呈活载体,以鸡传染性法氏囊病毒强毒株HJL-0504的抗原蛋白VP2基因为靶基因,并结合沙门氏菌侵袭蛋白RCK基因,构建了三株重组乳酸菌,即表达VP2蛋白的重组L.Lactis-VP2乳酸菌,表达RCK蛋白的重组L.Lactis-RCK乳酸菌,融合表达VP2蛋白和RCK蛋白的重组L.Lactis-VP2-RCK乳酸菌并在体外对RCK蛋白的功能进行验证。实验结果:本研究首先利用PCR方法扩增得到VP2基因和RCK基因,并分别将其插入到食品级载体pNZ8149质粒中,通过电转的方法转入乳酸乳球菌NZ3900,得到重组L.Lactis-VP2乳酸菌和重组L.Lactis-RCK乳酸菌。通过nisin诱导剂对重组菌株进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot验证VP2蛋白和RCK蛋白分别在重组乳酸菌中正确表达,且具有较高的稳定性,并对其表达定位进一步验证。为得到最佳的表达效果,首先对外源基因进行密码子优化,然后应用正交实验对诱导表达条件进行优化,得到OD600=0.5时开始诱导,诱导剂Nisin终浓度为2 ng/ml,诱导时间为5h的最佳诱导条件,并通过BCA总蛋白试剂盒和薄层凝胶扫描实验,对所表达蛋白定量分析。通过细胞吸附试验和激光共聚焦显微镜对重组L.Lactis-RCK乳酸菌进行分析,结果表明通过表达RCK蛋白能够使重组乳酸菌获得吸附细胞的能力。在此基础上,我们将VP2蛋白和RCK蛋白进行融合表达,构建重组L.Lactis-VP2-RCK乳酸菌。通过Western blot、细胞吸附试验、激光共聚焦显微镜和扫描电镜分析,结果表明VP2和RCK蛋白融合表达并不影响蛋白功能,VP2-RCK融合蛋白同时具有VP2蛋白免疫原性和RCK蛋白吸附细胞的能力。实验结论:成功建立乳酸球菌表达系统平台,完成重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙门氏菌RCK蛋白乳酸菌的构建。验证重组乳酸菌表达RCK蛋白能够使重组乳酸菌获得吸附细胞能力
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摘 要： 怎样使音乐课堂教学回归常态，引导教师由对优质课的追求转向富有生活化、个性化与生命力的教学探索？怎样强化优质课的导向功能，促进广大教师卓有实效地开展课堂教学实践与研究？音乐课堂要返璞归真，让优质课回归常态教学。上好“常态课”，“常态课”是教师基础素质的积累，是上好优质课的前提。教师要在一个真实的教研环境下研究课堂教学，用一颗平常心去上优质课，去听优质课。 关键词： 音乐课堂教学
目的:通过本研究掌握中国宁夏、内蒙古和山西省部分区域鼠形动物巴尔通体的感染情况、宿主构成、遗传进化特征,为巴尔通体疾病防控提供科学依据。方法:本次研究选取的调查地
音乐享有空灵、隽逸之美，净化着人们的灵魂。音乐大师贝多芬曾有惊世之语，音乐应当使人类生活爆发出火花。确实，音乐是一种全球化的语言，是人文精神传承的一种手段。通过音乐，人们了解人类文明的发展史，世界各地的风土人情，反之，通过传承人文了解更多的音乐。因此，音乐与人文文化密不可分。对于一个历史悠久、伟大的民族来说，音乐是民族的文化灵魂，是民族的通达血脉，更是一个民族的情感和人文精神之所在。可见，音乐与人
初中美术课是九年义务教育阶段学生的必修课，对学生的人格成长、情操陶冶、启迪智慧等方面都具有重要意义。但是由于种种原因，农村美术教育的重视程度相对于城市来说还是有一定差距的，这不仅需要社会、学校的努力，而且需要农村一线美术教师付出努力。某些客观原因我们是无法改变的，但我们能改变的是根据学校的实际情况，从实际出发，从自身出发，全面了解学生，转变教学观念，激发广大学生学习美术的兴趣。 兴趣，在学生的学
自2006年猪高热综合征在全国暴发以来,金山区始终没有真正掌握该病的病原及其他相关的流行病学情况。为掌握该病在金山区的流行状况,自2008年1月至2009年12月,结合两年的129
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提出了一种利用紫外光谱连续波长吸光度数据对多组分混合物定量分析的方法:把吸光系数和待测浓度同时作为自变量,优化分析出待测浓度。对多种物系实验数据的分析结果表明,该
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摘 要： 随着生活水平的普遍提高，艺术素养对一个人的健康成长的重要性日益凸显，加上交通的便利，外出写生的必要性已逐渐为广大学校和学生家长所认识，学生对外出写生的兴趣越来越浓，热情越来越高，创作水平也有了很大程度的提高。讲授风景写生这门课程时，为了培养学生亲近自然的态度、对大自然敏锐的洞察力、对纷繁物象的记忆力，以及创新思维的能力，作者根据因地制宜的原则和学生家庭的经济状况，带领他们到学校周边
我校是一所初级中学，学生普遍学习积极性不高。关于出勤、课堂纪律、作业、着装等问题，学校都制定了严格的规章制度，但每天我还是会发觉有人上课无精打采，有人作业雷同，有人懒洋洋地在校园中游荡……学生的学习倦怠问题非常严重，下面我谈谈这个问题的表现形式、形成原因和解决思路。 一、学习倦怠的症状和表现 学习倦怠是指学生因在体力、精力及能力上无法应付外界的要求，而产生的身心耗竭状态，是学生厌倦和恐惧学习任