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VEGF-A家族包括两类蛋白VEGF×××和VEGF×××b，其中VEGF165及VEGF165b是典型的代表，两者均是由165个氨基酸组成的糖蛋白，结构相似但功能相反。VEGF165具有促进内皮细胞的增殖、迁移及成管等，因此在促血管治疗某些疾病方面具有很大的应用前景。VEGF165b能够抑制VEGF165介导的上述功能，故在抗血管治疗某些疾病方面具有潜在的应用价值。尽管VEGF165及VEGF165b在临床上的前景良好，但VEGF165体内较短的半衰期及VEGF165b与受体VEGFR2较低的结合力限制了其应用。本课题针对VEGF165和VEGF165b这两个主要的应用上的问题开展研究。为延长VEGF165在体内的半衰期，本文采用了白蛋白（HSA）融合技术。本文成功构建了重组表达载体pPIC9K-HSA-VEGF165。该重组表达质粒经Sall线性化后电击转化入毕赤酵母GS115，通过MD平板筛选获得GS115/HSA-VEGF165工程菌。该工程菌的表达产物经Blue柱亲和层析和SP阳离子交换两步纯化， SDS-PAGE结果显示该融合蛋白的分子量约为89KD，产物纯度达95%以上。Western Blot结果显示该融合蛋白具有良好的HSA及VEGF165免疫原性。体外HUVEC细胞增殖实验表明融合蛋白HSA-VEGF165能明显促进HUVEC细胞增殖，在血清浓度6.6%和10%条件下，EC50分别为262.2ng/ml和25ng/ml，活性与单体相似。小鼠体内实验显示该融合蛋白HSA-VEGF165的半衰期与单体相比延长了近5倍。为提高VEGF165b与受体VEGFR2结合力，借鉴了VEGF165与VEGFR2受体结合位点分析的数据进行定点突变。通过重叠PCR的方法进行了E44R、E67R及EE7273RR的定点突变，成功构建了VEGF165b突变体的表达质粒pPIC9K-VEGF165bmut（VEGF165bmut分别为E44R、E67R和EE7273RR）；重组表达质粒经SaI1线性化后电击转化入毕赤酵母GS115中，通过MD平板筛选获得GS115/VEGF165bmut工程菌。表达产物经镍柱纯化后，SDS-PAGE和Western Blot结果显示VEGF165bmut的分子量约20~23KD，纯度达95%以上且具有良好的免疫原性。结合力ELISA测定结果显示：与VEGF165b相比，VEGF165bE67R对内皮细胞及受体VEGFR2的结合力得到了较好的提高，而E44R与EE7273RR的突变不能明显增加其与受体的亲和力。进一步对VEGF165bE67R细胞活性评价显示：VEGF165bE67R浓度为640ng/mL时，抑制VEGF165介导的内皮细胞增殖的抑制率可达100%；此外，当VEGF165bE67R浓度为360ng/mL时，还能明显地抑制肿瘤细胞A549的迁移，抑制率约为45%。本论文的研究工作在一定程度上解决了VEGF165体内半衰期较短及VEGF165b与受体VEGFR2结合力较低等问题，为VEGF165及VEGF165b在临床上的更为广泛的应用提供理论研究基础。