加替沙星、呋喃西林在食品中残留的酶联免疫检测法的研究

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随着全球经济一体化和食品贸易国际化的进行,食品安全已经成为一个重要的公共卫生问题。近几年来,中国出口食品的药物残留问题不断发生,食品出口也因药物残留问题屡屡受阻,给中国造成了巨大的经济损失,严重损害了中国食品的质量形象。解决产品药物残留问题,提高中国产品卫生安全质量,已成当务之急。兽药残留不仅直接对人体产生急、慢性毒性作用,引起细菌耐药性的增加,还通过环境和食物链的作用间接对人体健康造成潜在危害。为了保障消费者的生命安全,越来越多的国家已建立了一些药物残留的检测方法。目前国内外采用的残留分析检测方法主要有理化检测法(包括HPLC、LC-MS、LC-MS/MS等仪器法)、微生物检测法、免疫检测法(包括ELISA、RIA、EIA、FIA、MAIA)等。理化检测法准确、稳定、可靠,可以作为标准方法,但仪器设备昂贵,样品前处理复杂,费时,费力,不易普及;微生物检测法往往会高出最高检测量(MRLs),灵敏度不高。因此必须建立快速、灵敏、有效的检测方法。免疫检测法中的酶联免疫检测法(包括ELISA、MAIA等)克服了以上方法的缺点,是一种快速、灵敏、方便、易普及的检测方法,有着广阔的发展前景。本论文旨在建立加替沙星、呋喃西林酶联免疫检测法。本论文分别利用加替沙星与SEM衍生物(CPSEM)分子中的羧基通过EDC法成功的制备了加替沙星与呋喃西林的免疫原,并通过动物免疫获得了相应的高特异性抗体。在对加替沙星的残留检测研究中,本文分别利用了间接ELISA法、直接ELISA法与MAIA法。其中,利用间接法测得,加替沙星抗体的IC50是2.6 ppb,检测限为0.05 ppb,线性范围为0.1-50 ppb;该抗体有很高的特异性,仅对环丙沙星有较小的交叉反应(交叉反应率为3.0%);加替沙星在牛奶中的添加回收率在80-106%之间,批内变异系数低于14.3%,批间变异系数低于19.6%。利用直接法测得,加替沙星抗体的IC50是0.45 ppb,检测限低于0.01 ppb,线性范围为0.1-10 ppb;加替沙星在牛奶中的添加回收率在90%以上,批内变异系数低于4.6%,批间变异系数低于5.9%。利用磁分离免疫法对加替沙星的抗体进行检测,加替沙星抗体的IC50是0.085 ppb,检测限低于0.001 ppb,线性范围为0.01-10 ppb;加替沙星在牛奶中的添加回收率在97%以上,变异系数低于22%;加替沙星在猪尿中的添加回收率在80%以上,变异系数低于16.5%。在对呋喃西林残留检测研究中,抗体对于呋喃西林的IC50是10.5 ppb。该抗体具有良好的特异性,与其它硝基呋喃类药物及其代谢物几乎没有交叉反应(小于0.001%)。其中在对呋喃西林的残留检测中,呋喃西林的检测线性范围为2.5-100 ppb;呋喃西林在水体系中的添加回收率在84-106%之间;批内变异系数低于5.6%,批间变异系数低于7.3%。通过本课题的研究,成功地制备了用于检测加替沙星与呋喃西林的高特异性的多克隆抗体。利用这些抗体,本研究建立了加替沙星、呋喃西林的快速灵敏的酶联免疫吸附检测法,为最终开发商品化的酶联免疫试剂盒打下了良好的基础;并建立了加替沙星磁分离免疫检测法,为磁分离免疫检测方法的广泛使用提供了进一步的依据。
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