论文部分内容阅读
乳腺癌的病因学尚不十分清楚，遗传、激素、免疫与各种环境因素相互作用，可能共同参与了乳腺癌的发生。同时，与其他肿瘤不同的是，乳腺是主要激素与众多细胞因子反应组织器官，提示乳腺癌也是一个激素依赖性肿瘤。激素通过与特异性受体的结合而行使功能，随着对乳腺组织中激素受体家族功能的深入研究和对乳腺癌发生、发展过程中分子机制的研究进展，人催乳素(Prolactin，PRL)和催乳素受体(Prolactin receptor，PRLR)在乳腺生理、病理过程中的调控机制也重新引起人们的关注。在乳腺癌组织以及乳腺癌细胞系中，PRLR的表达明显高于正常组织和细胞，并且，PRLR的降解程度与Ser349磷酸化水平下降，从而使得乳腺癌组织和细胞中PRLR的稳定性增高，高水平的PRLR促进了乳腺癌的发生发展。因此，抑制或阻断人PRLR基因表达是探索乳腺癌分子治疗的新思路。本研究应用近年来发展起来的RNAi技术，特异性抑制或下调PRLR基因的表达，并观察其对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。我们首先设计并化学合成了三对靶向PRLR的小干扰RNA(smallinterfering RNA，siRNA)，以siRNA-GAPDH作为阳性对照，non-scilencing siRNA作为阴性对照，脂质体将其转染到高表达PRLR的人乳腺癌细胞MCF-7中，利用荧光定量PCR法检测转染后PRLR基因的相对表达量，发现转染siRNA(终浓度为100 nM)后24小时，与阴性对照组相比，GAPDH的表达被抑制68％，siRNA-PRLR1使得PRLR表达抑制达63％，从而成功筛选出有效的siRNA靶点序列。下续实验中，我们以此靶点siRNA-PRLR1作为处理因素，光镜下观察细胞形态学的改变，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期的变化，RT-PCR检测细胞周期素D1(Cyclin D1，CCND1)表达的变化。结果发现：转染siRNA-PRLR(100nM)后24小时，细胞增殖减慢，细胞间隙变大，死亡碎片增多，细胞生长抑制率为20％左右，碘化丙啶(Propidlum iodine，PI)染色检测发现G1期细胞增多，S期细胞减少，半定量PCR灰度分析显示CCND1的表达下调。初步的结果证实，我们设计的靶向PRLR的siRNA能够有效、特异地抑制PRLR的表达，进而影响PRL-PRLR结合引起的下游信号通路，抑制了乳腺癌细胞MCF-7的生长，细胞恶性表型被部分逆转。