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研究背景及目的因泪小管位置表浅,眼睑内侧外伤极易导致泪小管损伤,临床上多见下泪小管损伤,严重外伤常引起泪小管全程损伤,一期手术若不能及时实现泪道再通,延期修复问题较多,成功率低,极易导致患者终生流泪,影响其视力及生活。目前治疗泪小管全程损伤的标准方法有结膜泪囊吻合术和泪道义管置入术。但因结膜泪囊吻合术改变了泪囊生理位置,易使泪囊肌受损,失去正常虹吸作用,术后泪道虽然通畅,但泪溢仍然存在;而泪道义管置入术易因义管移位或肉芽组织增生无法达到预期效果。使用自体静脉移植重建泪小管保持了泪道原有的生理结构及功能且取材方便,经济可行。上世纪六十年代起,陆续开始有临床报道采用自体静脉移植修复泪道,但未见系统的相关实验研究。本实验研究在泪小管全程损伤泪囊尚存在的情况下,使用自体静脉结膜囊-泪囊移植重建泪小管,观察移植静脉能否存活或其改建情况,为临床应用提供实验资料。材料与方法1动物与分组成年健康日本大耳白兔39只,体重2.0-2.5kg,雌雄兼用,无眼部疾患及头面部异常。以抽签法随机抽取3只设为正常对照组(6眼),剩余36只兔(72眼)左右眼以随机分为睑结膜-泪囊组及泪湖-泪囊组(每组36眼),以术后6个观察时间点为标准将2个实验组分别分为6组,每组12眼。2手术方法将兔全麻后取其耳缘静脉剪裁修边后取8-10mm套用于泪道专用硅胶管上备用,由泪点入路切开泪囊并以巩膜穿刺刀于睑结膜或泪湖向泪囊做一通道,将取下的耳缘静脉置入通道内并将血管两端分别与睑结膜/泪湖及泪囊壁吻合,结膜端的硅胶管固定于睑缘,泪囊端硅胶管插入鼻泪管,缝合泪囊切开处。正常对照组不进行手术处理。3观察项目和时间点于术后1、3、5、7、14、28天观察实验组泪道通畅情况;术眼一般情况;移植血管病理及形态学特征;免疫组织化学染色分层计数明确上皮层及上皮下层细胞增殖情况。正常对照组观察项目同上,数据作为正常对照使用。4统计学分析使用SPSS11.0软件进行统计学分析。计量数据均采用(?)±s表示,睑结膜-泪囊组与泪湖-泪囊组PCNA阳性细胞指数比较采用配对t检验;睑结膜-泪囊组、泪湖-泪囊组分别与正常对照组PCNA阳性细胞指数比较采用独立样本t检验;睑结膜-泪囊组、泪湖-泪囊组、正常对照组荧光素排泄试验阳性时间比较采用单因素方差分析。以α=0.05作为检验水准。结果1结膜囊-泪囊静脉移植重建泪小管术后泪道通畅情况泪湖-泪囊组于术后14天,睑结膜-泪囊组于术后28天,泪道完全恢复导泪功能。术后28天睑结膜-泪囊组荧光素排泄实验阳性时间与泪湖-泪囊组及正常对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。2移植后术眼一般情况术后1天,结膜严重充血水肿,伴有大量分泌物,泪溢明显;术后3天,结膜充血水肿稍好转,分泌物明显减少,泪溢减轻;术后5天,结膜水肿基本消退,分泌物局限于硅胶管周,泪溢明显好转;术后7天,结膜充血仅限于硅胶管周结膜,水肿已消退,部分兔有轻度泪溢;术后14天,硅胶管周结膜轻度充血,外观上已无明显异常表现;术后28天,外观上已视不及异常表现。睑结膜-泪囊组与泪湖-泪囊组表现无差异。3移植静脉病理及形态学3.1大体观术后1天、3天,移植静脉严重充血高度水肿,管腔内可见大量分泌物;术后5天,充血水肿较前明显好转,渗出物减少;术后7天,充血水肿基本消退,渗出物及坏死组织视不及,血管内壁光滑,与周围组织分界已不明显;术后14天,移植静脉与周围组织颜色基本相同,肉眼难以辨认其分界;术后28天,仅能通过缝线判断移植静脉与周围组织分界。两实验组表现无明显差异。3.2 HE染色观察结果术后1天、3天移植静脉内皮细胞开始脱落、坏死,内皮下平滑肌细胞退化;术后5天,平滑肌细胞大量崩溃瓦解,成纤维细胞增生,出现大片红染均质无结构区域;术后7天,移植静脉邻近吻合口处可见吻合口处上皮开始向血管移行,上皮下成纤维细胞增生明显;术后14天,移植静脉被两端相邻组织上皮被覆,且新生上皮向血管中段移行,上皮下成纤维细胞增殖活跃;术后28天,移植静脉上皮层大部分被新生上皮覆盖,上皮下可见胶原纤维平行或交错分布,成纤维细胞分布其中。两实验组病理学表现基本相同。4移植血管细胞增殖情况观察(PCNA免疫组织化学染色观察结果)术后3天,移植血管阳性细胞主要位于上皮下,仅有极少数阳性细胞位于上皮层内;术后7天上皮细胞PCNA阳性细胞指数明显增加,上皮细胞及成纤维细胞PCNA阳性细胞指数均达到高峰;7天后上皮细胞及成纤维细胞PCNA阳性细胞指数逐渐下降。术后各个观察时间点睑结膜-泪囊组与泪湖-泪囊组上皮细胞及成纤维细胞的PNCA阳性细胞指数无明显差异(P＞0.05);术后28天睑结膜-泪囊组与泪湖-泪囊组上皮细胞及成纤维细胞PCNA阳性细胞指数均高于正常对照组(P＜0.05)。结论1.兔8-10mm长自体静脉结膜囊-泪囊移植重建泪小管移植血管改建形成膜性管腔。2.兔8-10mm长自体静脉结膜囊-泪囊移植重建泪小管后泪湖-泪囊组14天,睑结膜-泪囊组28天可完全恢复导泪功能。3.兔8-10mm长自体静脉结膜囊-泪囊移植重建泪小管后结膜囊及泪囊上皮移行形成新的泪小管上皮,28天时上皮覆盖仍未完成;血管壁肌层变性退化改建,28天仍处于增殖期。