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背景环孢霉素(CsA)是治疗难治性肾病综合征的首选一线药物且延长治疗时间能获得更持久的肾病缓解,但CsA相关肾毒性(CsAN)又限制了其长期使用。因此寻找敏感、特异并易于监测CsAN的生物标志物是解决CsA治疗难题的关键。我们在前期的研究中先后于肾病综合征患儿以及模拟人类微小病变肾病综合征的阿霉素大鼠模型中发现了体液(血液或尿液)肾损伤标志物NGAL、TGF-β对于评估CsAN具有潜在的指导价值,然而体液标志物的变化受全身诸多因素影响,因此进一步了解急性肾损伤生物标志物在肾组织的原位表达变化对筛选这些生物标志物在CsA相关肾毒性的预测价值具有重要意义。目的通过阿霉素诱导的肾病综合征大鼠模型,应用免疫组化法检测肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)、转化生长因子-β(TGF-β)在肾组织的表达及CsA治疗的不同阶段(7d、14d、21d)动态变化情况,并结合同时期肾组织病理损伤程度,探讨这些生物标志物对CsA治疗不同时期相关肾损伤评价的意义。方法1.动物模型分组:雄性SD大鼠,120~150g,共80只,留取8只为正常组,未施加任何药物,其余72只随机分成对照组和试验组,其中对照组分为空白对照组和激素对照组,试验组为激素+CsA组。对照组和试验组均给予一次性尾静脉注射盐酸阿霉素7.5mg/kg制作阿霉素肾病大鼠模型模拟儿童微小病变肾病综合征;2.空白对照组、激素对照组和激素+CsA组分别予以生理盐水、泼尼松、泼尼松+CsA治疗7d、14d、21d作为治疗的早期、中期和晚期,收集三个时间点的肾脏组织标本;3.制备肾组织石蜡切片进行HE和PAS染色,光镜下观察肾脏组织病理学改变包括肾小管损伤、间质内炎细胞浸润程度以及血管病变;免疫组化法检测NGAL、KIM-1和TGF-β在肾组织的表达;4.运用Image-Pro Plus图像分析软件检测,计算每个视野下阳性染色的积分光密度值(IOD);5.应用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资料首先进行正态性检验,正态分布的数据采用均数±标准差(x±S),非正态分布的数据以中位数(上下四分位数)[M(P25,P75)]表示,采用Kruskal-Wallis单因素分析组间差异,以P<0.05为差异有统计学意义。结果在治疗早期(7d)各组大鼠肾脏病理并未出现明显损伤,差异无统计学意义(P>0.05),而NGAL和KIM-1表达部位则由正常组主要以肾小球系膜区分布向对照组和试验组以肾小管上皮细胞分布为主变化,与正常对照组相比,空白对照组肾小管NGAL、KIM-1表达量均明显增高,并高于激素组和激素+CsA组(P<0.05)。治疗中期(14d)开始出现肾损伤,主要表现为肾小管上皮细胞空泡变性;NGAL在各组肾小管表达极少,主要分布于皮质区肾小管上皮细胞,与7d时相比空白对照组肾小管NGAL表达减少(P<0.05),而激素+CsA组则有增高趋势且明显高于同时段空白对照组和激素组,差异有统计学意义(P<0.05);KIM-1与NGAL表达部位和变化趋势相似。治疗晚期(21d)大鼠肾损伤明显加重,除了肾小管上皮细胞空泡变性,还出现了刷状缘脱落或高柱变矮柱,并且激素+CsA组开始出现间质炎性细胞浸润及小动脉透明变性,损伤部位从皮质外带逐渐扩散至内带接近髓质区;NGAL和KIM-1在空白对照组表达部位无明显变化,但是随着时间延长,肾小管分布范围逐渐减少,激素组表达部位和表达量上变化不明显,激素+CsA组NGAL和KIM-1在肾小管分布范围均有增多(P<0.05),多灶性分布并向近髓区扩展,此外这一时期KIM-1还呈现出肾小球分布增多的趋势,而NGAL在不同分组和时间点在肾小球上表达差异无统计学意义。TGF-β在各个时间各个组肾小球均未见明显表达,仅在14d和21d激素组和激素+CsA组部分标本散在小管间质和球周有微量表达。结论NGAL和KIM-1在CsA治疗的中、晚期肾小管上皮细胞原位表达明显增高,与肾小管间质损伤程度具有较好的一致性,可作为评价CsA相关肾毒性中晚期有意义的生物标志物。