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目的:观察青蒿琥酯及其联合甲氨蝶呤、雷公藤多苷对大鼠佐剂性关节炎(Ajuvant Arthritis,AA)的骨保护作用。方法:选择体重170~200g的雄性Wistar大鼠,测量双侧足爪容积后,于其右后足跖部常规消毒后皮内注射完全弗氏佐剂(0.1ml/只)建立AA模型,造模后第21天,将出现二次反应的大鼠随机分成模型组、甲氨蝶呤治疗组(1mg/kg.d)、青蒿琥酯治疗组(80mg/kg.d)、雷公藤多苷组( 8mg/kg.d ) ,甲氨蝶呤+青蒿琥酯治疗组(1mg/kg·d+80mg/kg.d)、青蒿琥酯+雷公藤多苷治疗组(80mg/kg·d+8mg/kg.d),每组8只,另随机取8只正常Wistar大鼠为空白对照组,当日用容积测量仪测量各组大鼠左后足足爪容积。治疗各组连续灌胃给药14天。于给药后第15天测量各组大鼠足爪容积后,经腹主动脉采血,离心,取血清,低温冰箱保存备检,酶联免疫吸附分析法测量大鼠血清中TNF-α、IL-1β、RANKL、OPG含量。采血后摘取踝关节进行固定、脱钙、石蜡包埋。HE染色,光镜下观察关节病理变化并进行评分。免疫组织化学染色法检测关节滑膜RANKL和OPG的表达,采用计算机图像分析方法对其表达进行定量分析。应用SPSS统计软件进行统计分析。结果:1各组大鼠一般状态及体重的变化:ART+TG组的情况最好,大鼠的精神状态佳、饮食好,活动好,体重不断增加。虽然MTX组、MTX+ART组后期关节症状较模型组明显减轻,但体重增加不明显,MTX+ART组有2只大鼠出现腹泻。给药后14天大鼠体重对照组258.37±15.33、ART组251.50±10.32、TG组249.62±10.08、ART+TG组250.00±10.02明显高于模型组232.50±16.33,差异有显著性(P<0.05);ART组、TG组、ART+TG组大鼠体重与对照组比较无明显差异(P>0.05)。2各组大鼠足爪容积及关节炎指数的变化:给药后14天左足足爪容积(ml)、肿胀度(%)、关节炎指数分别为MTX组(0.95±0.36、37.76±5.21、4.75±1.28)、ART组(1.46±0.19、50.38±8.04、5.37±0.51)、TG组(1.65±0.14、48.95±7.96、5.50±0.75)、MTX+ART组(1.2±0.46、35.59±6.83、3.87±0.64)、ART+TG组(0.72±0.22、40.97±7.5、5.25±0.88)与模型组(2.46±0.17、83.72±11.97、12.00±2.20)比较,差异有显著性(P<0.05);给药后14天足爪容积ART组、TG组和MTX+ART组与MTX组比较,差异有显著性(P<0.05)。给药14天后肿胀度ART组、TG组与MTX组比较,差异有显著性(P<0.05);关节炎指数ART组、TG组和ART+TG组与MTX+ ART比较,差异有显著性(P<0.05)。3各组大鼠血清IL-1β、TNF-α、RANKL、OPG水平的比较:模型组大鼠血清IL-1β(pg/ml)、TNF-α(pg/ml)、RANKL(pg/ml)、OPG(ng/ml)水平及RANKL/OPG比率分别为(75.39±15.38、52.91±31.36、70.0±17.63、153.07±38.70、0.47±0.13),显著高于正常对照组(15.19±3.55、15.26±2.95、15.58±2.3、83.69±10.45、0.19±0.04),差异有显著性(P<0.05);IL-1β、TNF-α、RANKL水平及RANKL/OPG比率分别为MTX组(10.61±5.11、11.15±3.30、12.41±5.02、0.12±0.08)、ART组(29.76±7.71、29.55±13.25、33.12±9.68、0.23±0.10)、TG组(31.61±8.44、26.49±9.87、26.81±9.30、0.18±0.08)、MTX+ART组(8.65±2.48、9.63±2.29、10.03±4.48、0.10±0.03)、ART+TG组(18.61±6.81、20.91±9.98、23.39±7.1、0.15±0.04)均较模型组减少(P<0.05),MTX+ART组差异最明显。血清IL-1β、TNF-α水平MTX组、ART+TG组与正常对照组差异无显著性(P>0.05);MTX+ART组、ART+TG组与MTX组差异无显著性(P>0.05)。血清RANKL水平MTX+ART组和MTX组与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。血清OPG水平MTX组123.11±10.27、ART组147.56±35.13、TG组152.57±22.69、MTX+ART组152.47±21.87、ART+TG组159.20±21.44均较对照组增加(P<0.05),ART+TG组差异最明显。4各组大鼠关节病理积分的比较:病理结果显示,模型组:滑膜有不同程度的充血、水肿及炎细胞浸润;滑膜层次增多(可达6层)、排列紊乱,有的滑膜向关节腔内呈现绒毛状增生,出现较明显的关节软骨破坏、纤维化;有的还出现多核巨细胞浸润。各用药组光镜下病理改变(滑膜组织增生,炎细胞浸润,软骨破坏程度等)均较模型组减轻。病理积分模型组2.1±0.36、MTX组1.15±0.30、ART组1.55±0.42、TG组1.69±0.67、MTX+ART组0.83±0.29、ART+TG组1.41±0.56与对照组0.12±0.23比较有明显差异(P<0.05)。MTX组、ART组、TG组、MTX+ART组、ART+TG组与模型组比较有明显差异(P<0.05)。MTX+ART组与MTX组比较有明显差异(P<0.05)。5各组大鼠滑膜组织OPG和RANKL表达:正常对照组大鼠滑膜细胞层及滑膜下层中RANKL、OPG阳性细胞表达及RANKL/OPG比率分别为(0.06±0.01、0.05±0.01、1.2±0.20);模型组RANKL、OPG阳性密度及RANKL/OPG比率(0.39±0.06、0.19±0.02、2.05±0.60)明显高于正常对照组,与正常组比较有显著性差异(P<0.05);RANKL、OPG阳性密度表达MTX组(0.18±0.01、0.12±0.02)、MTX+ART组(0.15±0.02、0.11±0.01)、ART+TG组(0.18±0.02、0.12±0.03)与模型组比较有明显差异(P<0.05)。RANKL阳性密度TG组0.23±0.04与ART+TG组0.18±0.02比较,差异有显著性(P<0.05);OPG阳性密度ART组0.15±0.02与ART+TG组0.12±0.03比较,差异有显著性(P<0.05);RANKL/OPG比率MTX组1.5±0.1、ART组1.4±0.3、TG组1.64±0.26、MTX+ART组1.36±0.40、ART+TG组1.5±0.13较模型组降低,差异有显著性(P<0.05),MTX+ART组最低。结论:1青蒿琥酯及其与雷公藤多苷或与甲氨蝶呤配伍均可明显降低AA大鼠足爪容积、关节炎指数和血清炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平,且配伍组显示一定的增效作用。2青蒿琥酯及其与雷公藤多苷或与甲氨蝶呤配伍可显著改善AA大鼠关节病理学损伤,下调血清和滑膜组织RANKL、OPG的表达及RANKL/OPG比值,提示青蒿琥酯及其上述配伍应用可能通过RANKL/OPG途径发挥其对AA大鼠的骨保护作用。3中药有效成分和中西药物配伍在抗炎、抑制骨破坏相关因子方面的协同作用,为临床治疗类风湿关节炎提供了新思路和新方法。