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背景:作为一种致死率、恶性程度均极高的肿瘤,胰腺导管腺癌以易转移、放化疗收效低、预后极差等为显著特征。近年来的多项研究已表明,在胰腺癌的肿瘤微环境中存在的大量间质细胞,其主体为胰腺星状细胞(Pancreatic Stellate Cells,PSCs)。现有证据已证实,PSCs可能导致PDAC细胞的抗放化疗、侵袭转移等能力增强,因此,PSCs与PDAC的发生发展密切相关。课题组的前期研究已发现,PSCs可表达大量半乳糖凝集素-1基因,即Galectin-1,并可激活NF-κ B通路,导致大量趋化因子的分泌。目的:探究高表达Galectin-1的PSCs通过CCL7/CCR5促PDAC进展的可能机制。方法:通过PSCs原代分离、鉴定及培养技术培养三株人源PDAC相关的PSCs,予以外源性重组蛋白Galectin-1刺激后应用趋化因子抗体芯片(液相芯片)技术检测PSCs中趋化因子的分泌变化情况。筛选出刺激前后表达差异最为明显的趋化因子,并通过转染Galectin-1慢病毒,应用ELISA、qRT-PCR、Western Blot等技术进一步验证以上结果。通过流式细胞术检测PDAC细胞(Miapaca-2、Colo357)中CCL7的受体表达情况(可能存在的受体有:CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)。通过 CCK8、EdU、Transwell 等实验研究 CC 趋化因子 7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)对PDAC细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。通过应用Maraviroc(CCL7受体CCR5的阻断剂)及BAY11-7082(NF-κ B通路阻断剂)进一步验证该结果。此外,还通过应用人源重组蛋白CCL7刺激PDAC细胞以探究其对癌细胞上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的影响,并应用Maraviroc、U0126(ERK-JNK通路抑制剂)进一步验证上述结果。最后,通过裸鼠皮下成瘤实验探索PSCs分泌的CCL7对胰腺癌肿瘤体积的影响。结果:(1)Galectin-1刺激PSCs后可促进趋化因子CCL7的分泌显著增加,这一过程可通过NF-κ B通路介导;(2)胰腺癌细胞系(Miapaca-2、Colo357)中,CCL7的受体仅有CCR5表达;(3)CCL7可通过其受体CCR5促进PDAC细胞(Miapaca-2、Colo357)增殖、侵袭、迁移能力增强,且CCL7/CCR5轴可通过ERK-JNK通路促进PDAC细胞的EMT进程。(4)将PSCs中CCL7分别过表达和沉默后与PDAC细胞(Miapaca-2)混合并种植于裸鼠皮下后,肿瘤体积分别呈现增加和减少。结论:Galectin-1刺激PSCs后可通过NF-κ B通路促进趋化因子CCL7分泌增加;CCL7又可通过其受体CCR5促进胰腺癌的EMT进程,ERK/JNK通路参与了此过程。本研究提示,在胰腺癌的综合治疗中,针对肿瘤微环境的治疗值得引起重视。