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目的:甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,近年来发病率上升非常显著。甲状腺癌整体预后较好,但仍然存在一定的复发和转移,严重影响患者生活质量甚至危及生命。ANRIL在众多恶性肿瘤中均存在高表达的现象,并有大量研究已经证明ANRIL能促进多种癌症的增殖、侵袭、转移,并抑制癌细胞的凋亡。但对于ANRIL促进癌症发生、发展的具体的机制目前研究还比较有限,也没有ANRIL在甲状腺癌领域的研究。本实验目的在于研究长链非编码RNA-ANRIL在甲状腺癌的侵袭和转移中的作用及其机制。方法:收集我院2013-2015年期间住院手术的105位甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,同时选取三种甲状腺癌细胞系K1,TPC-1,SW579和人甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1进行细胞实验。通过实时荧光定量PCR检测甲状腺癌组织、癌旁组织和各细胞系的ANRIL的表达情况,同时采用免疫组织化学的方法检测临床标本TGF-β1蛋白的表达情况。构建siRNA-ANRIL和siRNA-TGF-β1用于TPC-1,SW579细胞系的转染并依此分组,具体包括si-ANRIL组、si-TGF-β1组、si-ANRIL+si-TGF-β1组、阴性对照组和空白对照组。再采用MTT法、细胞体外侵袭实验和裸鼠尾静脉注射的方法,检测沉默ANRIL、TGF-β1的表达后对甲状腺癌细胞的增殖、侵袭和转移的作用。采用qRT-PCR检查各组细胞p15INK4b,p14ARF和p16INK4a的表达情况,并采用Western blot检测转染后各组细胞TGF-β1以及TGFβ/Smad信号通路中TGF-β1和p-Smad2/3的表达水平。结果:1.甲状腺癌组织样本中ANRIL的表达水平(10.28±1.21)明显高于癌旁组织(3.47±0.54),且具有统计学意义(P<0.001)。ANRIL的表达在不同的性别,年龄,病理类型,肿瘤大小,肿瘤是否多发和手术方式这几个方面上没有明显区别(P>0.05),而ANRIL的表达在不同甲状腺癌包膜外侵犯和不同的淋巴结转移情况存在明显区别(P<0.05)。2.TGF-β1在癌旁组织的表达阳性率明显低于甲状腺癌组织(28.57%VS71.43%,P<0.001)。有淋巴结转移和有包膜外侵犯的甲状腺癌患者标本的TGF-β1表达阳性率更高(均为P<0.05)。TGF-β1表达阳性率与患者年龄、性别、病理类型、肿瘤大小、肿瘤是否多发以及手术方式这些因素无关(P>0.05)。3.甲状腺癌细胞中K1(4.07±0.17)、TPC-1(9.69±0.28)、SW579(5.90±0.18)ANRIL的表达均明显高于正常人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1(3.02±0.14)(P<0.001)。4.细胞计数及MTT实验发现,si-ANRIL组细胞增值受到明显抑制(P<0.05)。si-TGF-β1组和si-ANRIL+si-TGF-β1组在24h和48h时检测OD值明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。si-ANRIL能明显抑制TPC-1、SW579细胞的增值,沉默TGF-β1能够促进TPC-1、SW579细胞的增值,而si-TGF-β1能够逆转si-ANRIL对TPC-1、SW579细胞增值的抑制效应。5.Traswell小室实验发现,抑制ANRIL表达能明显能抑制TPC-1和SW579细胞的迁徙和侵袭(P<0.05),而抑制TGF-β1能促进TPC-1和SW579细胞的迁徙和侵袭(P<0.05)。si-TGF-β1能够逆转si-ANRIL后对TPC-1、SW579细胞迁徙和侵袭的抑制作用。6.裸鼠内脏转移实验结果发现经尾静脉注射经si-ANRIL转染的TPC-1及SW579细胞肺转移结节数明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。经尾静脉注射经si-TGF-β1转染的TPC-1及SW579细胞肺转移结节数明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。而si-ANRIL+si-TGF-β1组肺转移结节数明显高于si-ANRIL组(P<0.05)。沉默ANRIL抑制TPC-1及SW579细胞的内脏转移,而沉默TGF-β1能促进TPC-1及SW579细胞内脏转移,si-TGF-β1能够逆转si-ANRIL对内脏转移的抑制作用。7.si-ANRIL组p15INK4b、p14ARF和p16INK4a mRNA的表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。si-TGF-β1组和si-ANRIL+si-TGF-β1组15INK4b的mRNA的表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而si-TGF-β1组和si-ANRIL+si-TGF-β1组p14 ARF和p16 INK4a mRNA的表达与空白对照组和阴性对照组相比没有明显变化(P>0.05)。si-TGF-β1仅能逆转沉默ANRIL后对p15INK4b表达的促进作用。8.si-ANRIL组在转染24h后TGF-β1和p-Smad2/3的表达明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。si-TGF-β1组和si-ANRIL+si-TGF-β1组TGF-β和p-Smad2/3的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论:ANRIL在甲状腺癌组织及甲状腺癌细胞系中均存在高表达的现象,并能促进甲状腺癌细胞增殖,侵袭和转移。ANRIL可能通过TGFβ/Smad信号通路降低p15INK4b的表达,从而促进甲状腺癌细胞的侵袭和转移,而沉默ANRIL能抑制甲状腺癌细胞的侵袭和转移。