【摘 要】
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秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)分为雌雄同体和雄性两种性别,结构简单,雌雄同体成虫只由959个细胞组成;通体透明,易于在显微镜下观察,生命周期短,形态较小,在实验室易于培养;同
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秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)分为雌雄同体和雄性两种性别,结构简单,雌雄同体成虫只由959个细胞组成;通体透明,易于在显微镜下观察,生命周期短,形态较小,在实验室易于培养;同时和其他的模式生物相比较,线虫的神经系统构成简单,由302个神经元构成,并被分为感觉神经元,运动神经元和中间神经元等几大类。基于以上原因,本研究采用线虫作为研究对象,用分子生物学的手段,通过构建包含有FLP-FRT、Cre-loxp等特异性重组位点的分子克隆载体,结合逻辑上“是”或“否”的启动子组合方法来特异性的标记线虫单个神经元,并探索出三个启动子驱动特异性神经元表达系统,同时完善了建立在Gateway技术上的启动子库,该启动子库的建立,大大方便了线虫相关的下游实验工作。基因表达的诱导可由物理因子(温度和光照等)或者化学因子结合基因转录调控因子以及酶来实现。为了方便下游实验操作,我们首先完善了线虫启动子库,同时在该启动子库的和FLP-FRT、Cre-loxp系统的基础上,成功设计了三个启动子共同驱动特异性神经元表达系统,在线虫体内验证后取得较好的效果。同时为了达到在时间和空间上调控基因的表达,对他莫昔芬和强力霉素两种药物在线虫体内的诱导表达条件进行了探索和研究。线虫启动子库的成功完善和三个启动子驱动神经元表达系统的建立不仅对线虫行为和功能学研究起到重要的作用,也为线虫的神经元的三维重构和数字线虫的建立打下了坚实的基础。
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