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甲状旁腺激素（PTH）是一种可以刺激正常骨组织更新、代谢的激素,它可以增加骨密度,改善骨结构。PTH的这些功能使之成为临床上治疗骨质疏松症的一种有效药物。注射用重组人甲状旁腺素（1-34）是根据PTH的cDNA序列,将其克隆至大肠杆菌表达载体中,并在大肠杆菌中表达获得的基因工程药物。根据我国药品食品监督管理局（SFDA）通过的《药品注册管理办法》,注射用重组人甲状旁腺素（1-34）属于生物制品7类,即已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品。目的:建立免疫放射测定（IRMA）法测定人血浆中重组人甲状旁腺素（1-34）浓度的方法,进行单次和多次给药后重组人甲状旁腺素（1-34）在健康人体内的耐受性和药代动力学研究,为指导临床制定安全、合理的用药方案提供理论依据,为新药审批和临床用药提供试验依据,并为Ⅱ期临床研究提供参考依据。方法:本研究分三部分。第一部分建立灵敏度高、专一性强、准确性好、重复性强的IRMA法测定人血浆中rhPTH（1-34）的分析方法学。测定步骤:先将待测样品200μL加入已标记的试管,再加入100μL125I标记的鼠PTH抗体至上述试管,旋涡震荡,把试管架倾斜约30度,用镊子向每管中加入一粒抗体包被珠。用封口膜盖住管口,室温孵育18至24小时,吸去每管中的液体。再向每管中加入2 mL洗涤液,洗涤三次并将液体吸净。在伽玛计数器上计数,记录结果。每份样品重复测定,各药盒都设置标准曲线,用以计算未知样品浓度。第二部分考察单次和多次皮下注射rhPTH（1-34）（10～40μg）在健康受试者体内的耐受性。随机选取40名健康志愿者,年龄、体重、身高均符合试验要求,常规体检、心电图检查,实验室检查包括血、尿常规,肝、肾功能等各项生化检查均无异常,无其它系统性疾病及药物过敏史。3个月内未参加过临床试验,试验前两周内及试验期间未服用其他任何药物。试验中随时观察受试者症状、体征以及各种不良反应,并定期进行实验室检查:血尿常规、肝肾功能、血液生化及血液电解质变化等。综合评价rhPTH在健康人体内的耐受性,整个试验期间配备有经验的医师和护士监护。所有计量资料均采用Excel或SPSS软件进行计算,以?X±SD表示,并进行t检验或方差分析。第三部分研究单次和多次皮下注射rhPTH（1-34）（10～40μg）在健康受试者体内的药代动力学特征。40名健康受试者随机平行分为低、中、高3个单次给药剂量组和1个连续给药中剂量组。按实验设计要求,40名受试者于试验前禁食12 h,次日晨给药前采集静脉血5mL,再分别单次和多次腹腔皮下注射rhPTH（1-34）,于给药后5,10,15,20,30,45,60,90,120,150,180,240min采集静脉血5mL,置于预先已经贴好标签并含抗凝剂的试管内（用15% EDTA抗凝）,3600 rpm 4℃离心分离血浆,每1mL血浆样品中加入48μL混合蛋白酶抑制剂,-80℃冻存待测。本试验采用IRMA法测定血浆中rhPTH（1-34）的浓度。采用Microcal公司Origin软件计算主要药代动力学参数,Tmax、Cmax采用实测值,AUC用统计矩方法计算。所有的数据均用几何均数±标准差（?X±SD）表示,采用单因素ANOVA和Student’s t test进行统计学分析。结果:1. 40名健康受试者,男20名,女20名,均完成试验。单次给药耐受性试验观察7天,多次给药耐受性试验观察14天。试验期间,全部试验的40名受试者应用不同剂量药物后均未有明显的不良反应发生;呼吸、心率、血压、脉搏、体温等生命体征未见异常;心电图正常。注射药物局部未发现皮肤红肿、瘀斑或皮疹等刺激性反应,试验观察期间未出现不适反应和异常体征。2.单次皮下注射rhPTH（1-34）10、20和40μg后观察至7天,20μg多次皮下注射rhPTH（1-34）后观察至14天。试验前后进行两次血液生化指标检查。40名健康受试者用药前后血液生化指标检查未发现异常改变,经t检验,各指标试验前后比较均无显著差异。试验前后进行尿常规指标检测,所有健康受试者尿常规指标无异常改变。3.本试验采用IRMA法测定健康志愿者血浆中rhPTH（1-34）浓度,最低检测限为20pg·mL-1,线性范围为25～2500pg·mL-1,在此线性范围内盒内双管的重现性好,CV%均小于10%,准确度在-1.7%～2.8%之间;不同药盒间批间精密度CV%也均小于10%,准确度在-3.0%～4.4%之间。4.单次皮下注射rhPTH（1-34）10、20和40μg后的药代动力学参数:T1/2ke分别为47.7±12.1、50.1±16.4和53.6±14.4min;MRT分别为56.3±3.9、57.8±11.9和84.7±9.3min;AUC（0-240）分别为9786.9±1456.3、15425.5±1661.1和32716.2±3158.0 pg·min·mL-1;Tmax分别为32.5±9.5m、24.0±9.7和35.0±13.5min;Cmax分别为139.8±36.3、203.9±50.4和295.8±43.5pg·mL-1。7天连续皮下注射rhPTH（1-34） 20μg后的药代动力学参数为:T1/2ke:50.9±5.9min;AUC（0-240）:96955.8±3076.3 pg·min·mL-1;Tmax:30.5±11.9min;Cmax:16955.8±3076.3 pg·mL-1。结论:1. IRMA的分析方法具有灵敏度较高,准确性好,专一性较强,操作简便快捷、可重复性强的特点。高低两种浓度样品-80℃冻存一个月后,PTH稳定性良好,与未经冻存的样本相比,统计学无显著性差异。适用于人体血浆中rhPTH（1-34）的定量分析。2.试验证明健康志愿者单次和多次皮下注射国产rhPTH（1-34）在10～40μg剂量范围内是安全的,不良反应轻微。3.用本方法测定受试者血浆rhPTH（1-34）浓度,内源性甲状旁腺激素抗原干扰低于LOQ。血药浓度随注射剂量增高而升高。多次给药和单次给药的药代动力学参数基本一致,药物在健康受试者体内无蓄积。