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研究背景 低剂量砷剂作为药物使用在传统中医中已有近千年的历史，砷剂用于肿瘤的治疗也已有几百年的历史。但砷剂同时又是一种剧毒物质，可引起染色体断裂、丢失、姊妹染色单体互换等细胞遗传学改变。因此，砷剂的药用价值长期以来一直被其毒副作用所掩盖。近年来，我国学者发现As2O3对急性早幼粒白血病具有良好的临床治疗效果，进一步研究发现其主要机制是诱导细胞凋亡，Science著文称这是继全反式维甲酸（ATRA）之后又一令人震惊的发现。由此，国内外学者对砷剂的抗肿瘤作用寄予了浓厚的兴趣，掀起了对砷剂抗肿瘤作用研究的热潮。然而冲剂对实体肿瘤作用的研究刚刚起步，尚处于基础研究阶段，至于砷剂抗肿瘤作用的确切机制更是知之甚少。为此，本文进行了As2O3对人胃癌SGC-7901细胞体外作用的研究工作，旨在为寻找新的有效治疗胃癌的药物提供理论依据。研究目的 1、观察As2O3在体外对人胃癌SGC-7901细胞抑制生长、诱导凋亡的生物学效应。 2、探讨As2O3抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。研究方法D 南京医科人学硕十学位论文 －1、细胞培养：人胃癌 SGC刁9们细胞为 AS，0体外作用的模型，D 培养于含1狐胎牛血清的RPMI刁640培养基中。D 2、MTT还原法检坝 1～ 8 U mo l／L的 As几作用 12 一 4 8J贴对D ％卜7901圭胞生长的影响。D3、光学显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态学改变。D－4、流式细胞术吓M)及原位末端标记法门ML标记法)检D 测兰胞凋亡寸数。DS、流式细胞术吓CM)及光学显脆分析细胞周期。】6、免疫组织化学 SABC法检坝增殖细月核抗原（PCNA）、BclZ、 Bax、c价ye、PS 3蛋白的表达。D7、流式细月术（FCM）检测ApoZ．7和Caspase－3蛋白的表达。－8、by． H瞅苏糖醇门TT)为 H…原剂，观察 DTT对 A S。0。D)Ejji－M白％卜79m乡月凋亡的影响。D 9、TUNEL标i6及免疫组织化学结果以附D刁 型计算机图象D 分析系统分析。”DD 研究结果DDI、MTT还原法结果显示，AS，0。在体卜明显抑制SGC－7901妄胞D 的增殖，以 2 11 mo几以上作用更为显著，且呈现明显的作用时间 l 和hlJ量依赖关系。l 2、形态学观察发现典型的凋亡细胞，透射电镜下可见线粒体D 变性nD 3、4－8 lmol儿白 As；0；处理 SGC－7901细胞 12h、24h、48h 后，在细胞周期GI期前；出现明显的亚二倍体峰，同时可见细胞J 周期被不同程度地阻滞在 GZ州期，并伴有 GO川 期比例下降。l 4、TUNEL标i己结果表明，SGC一7 9 01兰胞凋亡寸数随炽，0。剂量D 增力。及作用时间的延长而逐渐增力。，8 u moVL的叱，0。处理 48h 0 后可达 2 3．4。l 5、免疫组织化学结果发现，AS，0。处理后 PCNA表达明显降低 l Bax蛋白表达显著增高，Bcl刁蛋白在对照组f腺达，As。0；处理 24h 后即几乎检测不到，CAlyC蛋白在 AS几处理 12h、uh后有所降低，l 2D 南京医科人学硕十学位论文DD48h后又略有回升，P53蛋白在实验组及对照组均未见表达。 6、经流式细H狐检坝，A S ，0。处理后ApOZ．7、Casppse－3蛋白l 表达均明显增加。l 7、DTT可部奶中制 AS＊所致的 胃癌 SGC－7901兰胞凋亡。D 研究结论DDI、AS＊在体外可明显抑＄1］胃癌SGC－7901细胞增殖，并可诱导DD 该细胞系凋亡；该双重效应呈剂量和作用时间依赖性，提示AS儿DD 有治疗胃癌的潜在价值。D 2、AS，0。4制胃癌SGC－7901细胞增殖的生物学效应可能与下调DPCNA表献影响线粒体能量恻有关。 3、兰胞周期GZ／M期阻滞是加。0。腑％C一7961兰胞凋亡的作D 用机制之一，为将来与其它细胞周期阻滞药、细胞周期特异性药D 物的鹏应用提供了理论依据。 、4、Bcl一2、Bax、c一Myc、ApoZ．7和 Caspase一3蛋白参与了加；0； 诱导的SGC一7901兰月凋亡过程，琉基可能是AS人作用的邮点IH一。l15、对细胞凋亡的判定应联合应用多种手段方可获得可信的结lD 论。