幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在全球人群中的感染率高达50%,它与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生密切相关。H.pylori感染宿主后可产生不同的临床结局,大部分人无任何症状,少数发展为胃炎及消化性溃疡等疾病,极少数发展为胃癌。研究不同菌株的致病能力,对于了解H.pylori感染宿主的病理过程,合理有效的对其进行防治具有重要意义。　　 蒙古沙土鼠(Mongoliangerbils,MGs)腺胃结构和功能与人类极其相似,极少患自发性胃炎,且不是H.pylori的自然宿主,是目前已知的研究人类胃疾病唯一的动物模型。利用MGs模型研究不同来源H.pylori致病变能力是当前研究的热点。大量研究资料表明不同H.pylori分离株致MGs胃粘膜损伤能力存在较大差异,即使是同一家族菌株因某一关键基因突变,致病能力也明显不同。此外,有学者认为H.pylori通过对免疫系统的长期慢性刺激,不仅可导致人类胃部病变,还可能与胃外多脏器病变的发生相关。然而,在所有胃外病变中,除特发性血小板减少性紫癜发生与H.pylori感染被广泛接受外,其他疾病与H.pylori感染之间的关系,尚缺乏直接证据。迄今,H.pylori长期感染导致MGs的致病作用,仅聚焦在胃部病变,H.pylori是否能导致MGs胃外多脏器病变,尚未见报道。　　 高盐饮食与H.pylori感染之间关系密切,高盐可造成胃粘膜短暂性的损伤,破坏粘膜表面粘液屏障,利于H.pylori在胃内定植。H.pylori与10%高盐饮食协同作用,可以促进MGs胃粘膜iNOS及COX-2表达水平。摄入过量氯化钠可以增强H.pylori在胃黏膜的定植能力,且能增加H.pylori在胃粘膜的定植数量,进而参与胃疾病恶性转化。然而,高盐环境诱导培养.H.pylori是否改变其致病能力及其机制尚不清楚。JohnT.etal用含不同盐浓度(0.25%-2%)培养基培养H.pylori26695,发现其cagA转录水平及蛋白表达随盐浓度升高而增加,2%盐浓度导致H.pylori生长缓慢。Hanan Gancz,etal则发现,经高盐诱导后(327H.pylori菌株逐渐开始停止繁殖,并最终死亡。H.pylori生长的最适盐浓度是0.5%-1%,2%盐浓度抑制其生长。结果提示,H.pylori对高盐环境的耐受能力可能存在菌株的异质性,26695菌株更易耐受高盐刺激。我室前期研究发现,高盐诱导培养H.pylori生物学特性发生了改变,其ATP活力下降、毒力基因转录及表达能力下降,但仍然具有强效尿素酶活性及细胞定植能力。目前关于高盐诱导H.pylori菌株致病能力的研究,仍停留在体外实验阶段,体内实验研究尚未见报道。　　 综上,本研究拟应用不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株长期感染MGs,深入探讨胃癌及胃炎分离H.pylori菌株致MGs多脏器致病变作用,同时,探讨高盐诱导前后Hpylori菌株致MGs多脏器病变能力的变化,旨在鉴别与胃癌发生密切相关的H.pylori菌株,为深入探讨不同疾病来源H.pylori可能的致病机制提供实验基础。同时,为阐明高盐诱导H.pylori菌株致病能力的变化以及H.pylori与胃外疾病的关系提供动物实验证据。　　 目的：　　 1、探讨胃癌及胃炎分离H.pylori菌株致MGs多脏器致病变作用,以期鉴别与胃癌发生密切相关的H.pylori菌株。　　 2、探讨高盐诱导前后不同疾病来源H.pylori菌株致MGs多脏器病变能力的变化,以期阐明高盐环境对H.pylori致病变作用的影响。　　 3、为H.pylori与胃外疾病的关系研究提供动物实验证据。　　 方法：　　 1、建立不同疾病来源及高盐诱导H.pylori长期感染的MGs模型　　 分别经灌胃接种B975(浅表性胃炎分离株)、4854(胃癌分离株)、国际标准株ATCC43504、B975高盐诱导株、4854高盐诱导株及ATCC43504高盐诱导株感染蒙古沙土鼠,在感染后13周、26周及73周对MGs进行解剖。　　 2、不同疾病来源H.pylori基因型检测　　 采用PCR方法,检测不同疾病来源H.pylori菌株基因型cagA、cagG、cagE、cagM、cagT、vacAs1、vacAm1、vacAm2、iccA1、iceA2、oipA、PPIase、ureB、16s和hrgA,分析这些基因型的遗传差异;　　 3、不同疾病来源及高盐诱导H.pylori在MGs胃粘膜定植能力的判定　　 采用抗H.pylori-igG抗体进行免疫组化染色,判定H.pylori感染情况。　　 4、不同疾病来源及高盐诱导H.pylori长期感染致MGs多脏器病变作用的研究　　 采用HE染色,对MGs多脏器病变进行组织病理学评价,观察比较不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株对MGs多脏器的致病变能力差异;采用AB-PAS、Giemsa染色及免疫组化染色(PCNA)方法,比较不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株致MGs胃粘膜增殖及肠化生差异;采用日本NDP扫描系统,对MGs胃粘膜不同部位进行测量,比较不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株对MGs胃粘膜厚度差异。　　 结果：　　 1、不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株均能在MGs胃粘膜定植,随感染时间的延长,定植能力逐渐下降,4854组及B975组H.pylori定植能力未见明显差异,高盐诱导后,两株H.pylori菌株定植能力均下降。　　 2、感染H.pylori后第13周,4854组MGs粘膜糜烂/溃疡发生率(80%),与13周相比,第26及73周粘膜糜烂/溃疡发生率下降;第13周,B975组粘膜糜烂/溃疡发生率40%,26-73周粘膜糜烂/溃疡发生率下降。高盐诱导后,4854组及B975组MGs粘膜糜烂/溃疡发生率及严重程度均增加。　　 3、不同疾病来源H.pylori对MGs胃粘膜的致病变能力存在差异,胃癌分离株导致MGs胃粘膜炎症、糜烂/溃疡、小凹上皮增生、肠化生及腺体萎缩发生率明显高于胃炎分离株。胃癌分离株还能导致粘膜发生异型增生及粘膜相关淋巴组织淋巴瘤。　　 4、高盐诱导前后不同疾病来源H.pylori长期感染致MGs病变能力存在差异,不同疾病H.pylori分离株导致MGs发生炎症、粘膜变性/坏死及腺体萎缩发生率明显高于其高盐诱导株,而高盐诱导株致粘膜糜烂/溃疡及小凹上皮增生发生率高于其分离株。胃癌分离株高盐诱导前后发生肿瘤类型不同,分离株发生2例粘膜相关淋巴组织淋巴瘤,而高盐诱导后则发生2例肥大细胞瘤。　　 5、不同疾病来源H.pylori分离株均可导致粘膜增殖及粘膜厚度发生改变,胃癌分离株致粘膜增殖及粘膜变薄能力强于胃炎分离株;高盐诱导后,H.pylori致粘膜增殖及厚度变化程度低于其分离株。　　 6、不同疾病来源及高盐诱导H.pylori菌株均与胃外多脏器病变发生相关,特别是与胆囊上皮炎症/增生及皮肤囊泡关系密切。　　 结论：　　 1、不同疾病来源H.pylori菌株可以在MGs胃粘膜长期定植,随着感染时间延长,细菌定植能力逐渐下降。　　 2、不同疾病来源的H.pylori菌株对MGs胃粘膜的致病作用不同,胃癌分离H.pylori菌株4854较胃炎分离株的致病能力更强,可以导致MGs发生粘膜相关淋巴组织淋巴瘤;可以引起胃外多脏器病理改变。　　 3、高盐诱导后H.pylori菌株在胃粘膜的定植能力下降、致MGs糜烂/溃疡病病变增多、致腺体增殖或萎缩病变减少、可以引起胃外多脏器病理改变。　　 4、高盐诱导胃癌分离株可以导致MGs胃粘膜发生肥大细胞瘤。