论文部分内容阅读
第一部分多囊卵巢综合征大鼠模型的建立目的:建立一种理想的多囊卵巢综合征(PCOS)动物实验模型。方法:选用23日龄雌性SD大鼠,实验组大鼠采用脱氢表雄酮(DHEA)硫酸钠盐制剂硫酸普拉睾酮钠9mg/100g/日+注射用水0.4ml皮下注射20天,对照组同期每日皮下注射0.4ml注射用水,连续20天。分别观察两组大鼠卵巢外观、重量、光镜HE染色形态学改变及透射电镜卵巢超微结构变化,测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)含量。结果:1.实验组大鼠卵巢重量显著高于对照组(P<0.01),肉眼可见卵巢表面较多囊性扩张的卵泡。2.光镜HE染色见实验组大鼠有较多囊性扩张的卵泡,卵泡颗粒细胞层变薄,卵泡膜细胞增生,较少有黄体形成。3.透射电镜观察见实验组大鼠卵巢颗粒细胞形态变形,呈梭形变,细胞核核形不整,核内染色质浓集。细胞间纤维增生,卵泡膜细胞层数增多,膜细胞内可见到脂滴。4.实验组大鼠血清T和E2浓度均显著高于对照组﹙P<0.05﹚。血清P浓度较对照组偏低,PRL浓度较对照组稍高,但差异无显著性(P>0.05)。结论:硫酸普拉睾酮钠诱导的雌性大鼠PCOS动物模型卵巢病理形态学改变及血内分泌改变与PCOS病人相似,是较理想的PCOS动物模型。第二部分多囊卵巢综合征大鼠卵泡发育障碍与颗粒细胞凋亡的相关性目的:探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍与颗粒细胞凋亡的相关性。方法:采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,透射电镜及TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果:1.透射电镜显示,PCOS大鼠卵巢颗粒细胞表现出凋亡所特有的超微结构变化,细胞核核膜皱缩,核形不整,核内染色质浓缩,线粒体肿胀,线粒体嵴断裂甚至消失。在凋亡后期颗粒细胞内可见典型的半月形凋亡小体。2. TUNEL法检测PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡发生率较对照组明显增强(P<0.01),窦前卵泡颗粒细胞凋亡发生率两组无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未发现明显凋亡征象。结论:PCOS大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞凋亡明显增强,这可能是PCOS卵巢中窦状卵泡发育停滞的原因之一。第三部分TRAIL及其受体DR4、DcR1在多囊卵巢综合征大鼠卵泡发育中的作用目的:探讨TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)及其受体DR4(死亡受体4)、DcR1(诱骗受体1)在PCOS大鼠卵泡发育中的作用。方法:采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,免疫组化染色、RT-PCR分析及Western blot分析观察TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果:1.免疫组化结果显示,PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞TRAIL蛋白的表达较对照组明显增强(P<0.05),窦前卵泡颗粒细胞TRAIL蛋白的表达两组无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未见TRAIL蛋白表达。RT-PCR及Westernblot分析显示,PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞TRAILmRNA及TRAIL蛋白的表达较对照组明显增强(P<0.01)。2.免疫组化结果显示,两组大鼠窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞DR4蛋白的表达无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未见DR4蛋白表达。RT-PCR及Westernblot分析显示,两组大鼠卵巢颗粒细胞DR4 mRNA及DR4蛋白的表达无显著性差异(P>0.05)。3.免疫组化结果显示,PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞DcR1蛋白的表达较对照组明显减弱(P<0.01),窦前卵泡颗粒细胞DcR1蛋白的表达两组无显著性差异(P>0.05),两组卵巢始基卵泡颗粒细胞未见DcR1蛋白表达。RT-PCR及Westernblot分析显示,PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞DcR1mRNA及DcR1蛋白的表达较对照组明显减弱(P<0.01)。结论:TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS大鼠卵泡发育颗粒细胞凋亡中发挥了调控作用。TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS颗粒细胞的表达异常可能是导致PCOS卵泡发育障碍的机制之一。第四部分Caspase3在多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞的表达目的:探讨TRAIL信号途径在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞诱导凋亡的最终效应阶段。方法:采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,Westernblot分析及RT-PCR分析观察Caspase3(半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3)在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果:1.Westernblot分析显示,PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞活性Caspase3蛋白的表达较对照组明显增强(P<0.01)。2. RT-PCR分析显示,PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞Caspase3 mRNA的表达较对照组明显增强(P<0.01)。结论:TRAIL信号途径在PCOS大鼠颗粒细胞诱导的凋亡可能最终经过了Caspase级联,引起Caspase3的激活导致细胞凋亡。