背景骨肉瘤多发于青少年,致残和病死率高,预后差。随着测序技术和分子生物技术的发展,环状RNA成为肿瘤研究中的热点,作为潜在的肿瘤标志物,找到可用于骨肉瘤的诊断及治疗靶点的环状RNA临床意义重大。目的通过高通量测序分析骨肉瘤组织的环状RNA差异表达谱;研究hsa_circ₀001017在骨肉瘤细胞中的生物学功能;分析hsa_circ₀001017在骨肉瘤患者组织和外周血清中的表达变化,探讨其临床意义。方法1)利用第二代高通量测序技术检测3例骨肉瘤组织和1例正常骨组织样本的环状RNA表达谱;挑选其中差异显著且样本间一致性较好的5条环状RNA,在3种骨肉瘤细胞系和6例骨肉瘤患者组织样本中进行qRT-PCR验证,筛选可能作为肿瘤标志物的环状RNA。2)构建筛选出的hsa_circ₀001017过表达和干扰载体,转染人骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测转染后细胞的增殖能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,流式细胞检测凋亡情况。3)入选39例骨肉瘤患者和24例健康志愿者,qRT-PCR检测骨肉瘤组肿瘤组织、瘤旁组织及两组外周血清hsa_circ₀001017的表达变化,ROC曲线分析hsa_circ₀001017对于骨肉瘤的诊断价值,多因素回归分析研究hsa_circ₀001017与肿瘤病理指标的相关性,采用生存曲线和COX回归分析探讨hsa_circ₀001017对骨肉瘤患者生存率的影响。结果1)3例骨肉瘤组织与正常骨组织间共同差异表达的环状RNA共246个,其中一致上调80个,一致下调166个。6例骨肉瘤组织和3个骨肉瘤细胞系中hsa_circ₀000704、hsa_circ₀001017、hsa_circ₀005035 均表达上调,hsa_circ₀001016、hsa_circ₀008934均表达下调,与测序结果一致。2)成功构建了 hsa_circ₀001017的过表达和干扰载体并转染U2OS细胞。MTT实验显示,hsa_circ₀001017过表达后U2OS细胞的增殖能力显著增加,而hsa_circ₀001017敲低后增殖能力下降。Tanswell实验显示,hsa_circ₀001017过表达后细胞的迁移和侵袭能力显著增加,而hsa_circ₀001017敲低后迁移和侵袭能力下降。流式细胞凋亡检测显示,hsa_circ₀001017过表达后细胞凋亡减少,而hsa_circ₀001017敲低后细胞凋亡增加。3)与健康志愿者相比,骨肉瘤患者外周血清hsa_circ₀001017的表达显著上调。与瘤旁组织相比,骨肉瘤患者肿瘤组织和外周血清hsa_circ₀001017的表达均显著上调且呈线性相关。绘制ROC曲线,外周血清 hsa_circ₀001017 的 AUC 为 0.8579,肿瘤组织 hsa_circ₀001017的AUC为0.8097。按血清hsa_circ₀001017的表达量将骨肉瘤患者分为高表达组和低表达组,多因素回归分析显示hsa_circ₀001017表达上调与骨肉瘤Price分级和肺部转移正性相关;生存分析显示,血清hsa_circ₀001017高表达组的总生存率显著下降,COX回归分析提示血清hsa_circ₀001017表达上调是影响骨肉瘤患者生存期的独立危险因素。结论1)高通量测序构建的骨肉瘤的环状RNA差异表达谱结果可靠。2)Hsa_circ₀001017在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中均表达上调,与测序结果一致。3)细胞体外实验发现,hsa_circ₀001017过表达可促进U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭,而抑制细胞的凋亡,而hsa_circ₀001017敲低作用相反,提示其在骨肉瘤中发挥了癌基因的作用。4)临床中,骨肉瘤患者的外周血清和组织样本中hsa_circ₀001017的表达一致上调,hsa_circ₀001017表达上调对骨肉瘤有较高的诊断价值,并且hsa_circ₀001017上调越明显,提示骨肉瘤病情越严重,预后越差。