论文部分内容阅读
研究目的：利用磁珠分选技术(MACS)从人胃癌BGC823/5-Fu细胞中分选出CD44(+)细胞,并鉴定其具备干细胞样生物学特性。探讨健脾养胃方对CD44(+)胃癌干样细胞耐药基因表达的影响,为阐明健脾养胃方影响耐药提供重要实验依据。研究方法：通过MACS技术分选人胃癌BGC823/5-Fu细胞中的CD44(+)细胞,悬浮培养于含B27、EGF、FGF的无血清DMEM/F12培养基中。通过荧光显微镜观察、软琼脂集落形成实验、分化实验和流式细胞术对分选出来的CD44(+)BGC823/5-Fu细胞进行初步鉴定。RT-PCR实验检测中药组(每组加入健脾养胃方2、4、8mg/ml)和空白组(不加药)的CD44(+)胃癌干样细胞耐药基因MDR1、MRP1、ABCG2mRNA的表达情况。研究结果：1.采用MACS技术从BGC823/5-Fu胃癌细胞中分选出CD44(+)细胞和CD44(-)细胞,均置于配置好的无血清培养基中悬浮培养。倒置显微镜观察可见CD44(+)BGC823/5-Fu细胞培养数天后可成球形生长,而CD44(-)BGC823/5-Fu细胞未成球。2.荧光显微镜观察显示,可清晰地观察到CD44(+)BGC823/5-Fu细胞胞膜上的绿色荧光,阳性表达较高。3.分化实验显示,CD44(+)BGC823/5-Fu细胞具有分化能力。4.流式细胞术显示,CD44(+)BGC823/5-Fu细胞在周期分布上,S期细胞百分比和增殖指数(PI)均高于阴性细胞。5.软琼脂集落形成试验显示,CD44(+)BGC823/5-Fu细胞形成集落的能力强于阴性细胞。而CD44(+)BGC823/5-Fu细胞经健脾养胃方处理后,形成的集落数明显减少。6.RT-PCR结果显示,健脾养胃方可下调CD44(+)胃癌干样细胞MDR1、MRP1、ABCG2mRNA的表达,且随浓度的增加下调作用增强。研究结论：经磁珠分选的CD44(+)BGC823/5-Fu细胞具有胃癌干细胞样生物学特性。通过RT-PCR法,证实健脾养胃方可下调CD44(+)胃癌干样细胞MDR1、MRP1、ABCG2mRNA的表达,并且下调作用呈浓度依赖性。