水稻条纹病毒( Rice stripe virus,RSV)引起的水稻条纹叶枯病是水稻上的一种重要病毒病,该病在我国的分布极为广泛,并已经给农业生产带来严重的损失。RSV是一种多组分RNA病毒,其基因组由4种单链RNA(single-stranded RNA,ssRNA)组成,它们共编码7个蛋白,包括RNA的RNA聚合酶(RdRp)、NS2、NSvc2、CP、NS3、SP、NSvc4。本文以RSV NSvc4为诱饵蛋白,在“武育粳3号自然突变体”文库上筛选到的NB15(brown planthopper-induced resistance protein 1 contains CBS domain)、在“武育粳3号”文库筛选到的NW1(CI2E contains InterPro domain(s);Potato inhibitor I family)蛋白作为对象,对它们与CP、SP、NSvc4之间的相互作用进行验证。提取水稻RNA,通过RT-PCR扩增获得了水稻NB15和NW1完整基因,分别将其与酵母双杂交捕获载体pGADT7相连,构建重组子pGAD-NB15、pGAD–NW1。将pGAD-NB15和pGAD-NW1分别与构建好的重组子诱饵质粒pGBK-NSvc4、pGBK-CP、pGBK-SP两两共转化到酵母菌AH109中,转化产物涂布于不同的营养缺陷型培养基平板,从而检测NB15和NW1全长基因表达产物与RSV CP、SP和NSvc4的互作情况。结果表明蛋白NB15、NW1均能与NSvc4蛋白发生互作,与CP、SP均不能产生互作。设计特异引物,利用荧光定量PCR技术检测水稻基因NB15与NW1的mRNA在健康水稻叶片和受RSV侵染的水稻叶片中的表达量情况。比较mRNA的表达量差异,从而分析RSV侵染及病毒蛋白与寄主蛋白互作对mRNA的影响。结果表明,NB15的mRNA在RSV侵染后的水稻中与在健康水稻中的表达量相比表现为下调;NW1的mRNA表达量在RSV侵染后的水稻中与在健康水稻中的表达量相比表现为上调。构建了水稻基因NB15的融合蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中得以表达,SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定融合蛋白的分子量约为27KDa。割胶纯化蛋白,分多次间隔免疫健康公家兔,制备了His-NB15抗血清,运用ELISA技术检测其效价(1:12800),并通过Western-blot印迹表明,它与水稻叶片总蛋白有很强的免疫性,但健康水稻中检测NB15较病叶中的含量低;制备的NB15抗血清,可用于后续的免疫胶体金及细胞定位研究。研究水稻条纹病毒基因组RNA编码的NS3蛋白与其他基因组分编码的蛋白SP、CP、NSvc4之间的互作。RT-PCR扩增目的基因NS3,构建酵母表达载体,将其分别与酵母诱饵载体pGBKT7与酵母捕获载体pGADT7相连,得到重组子pGAD- NS3、pGBK -NS3。自身毒性的实验结果表明,NS3蛋白对酵母细胞无毒性和自身激活活性,也不存在自身互作。将这两个重组子分别与CP、SP、NSvc4两两共转化到酵母菌中,转化产物涂布二缺、三缺、四缺平板,后经X-a-Gal染色观察,结果表明,NS3与SP的转化产物能在三缺平板上生长并在相应培养基中变蓝色,说明NS3与SP蛋白存在互作。