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前言类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病,以关节滑膜炎及对称性关节骨、软骨破坏为主要特征。类风湿性关节炎的病因尚不清楚,但我们已经明确它的发生与免疫异常有关,多种炎性细胞因子在发病过程中起着极为重要的作用。这些细胞因子通过信号转导途径的级联放大作用,导致蛋白酶、生长因子和许多与炎症过程相关化合物的含量变化。参与类风湿性关节炎发病的细胞内信号转导途径种类繁多、错综复杂,其中两种途径发挥重要作用:丝裂原活性蛋白激酶(MAPKs)途径和核因子-κB(NF-κB)途径。转化生长因子β激活激酶(TAK1,MEKK7)是MAP3K家族的成员之一,能被多种细胞因子包括IL-1β,IL-18,TNF-α等激活,处于这两条途径的分支点上。TAK1作为炎症反应中细胞信号传导上游重要的激酶,可能对类风湿性关节炎的发病起着重要的调节作用。目前已有研究表明在骨性关节炎软骨细胞中TAK1—定规模的表达,并且阻遏TAK1基因可以使其下游炎性因子表达减少。本实验采用病例对照研究分别检测类风湿性关节炎(RA)、骨性关节炎(OA)及非关节炎病人膝关节滑膜中TAK1基因mRNA和蛋白的表达,并比较其活性差异,以验证TAK1与类风湿性关节炎发病的相关性,为进一步从分子水平深入探讨类风湿性关节炎的发病机制奠定基础,为临床上治疗类风湿性关节炎提供新靶点。材料与方法一、实验材料1、23例膝关节滑膜组织标本来源于中国医科大学附属第一医院骨科住院患者。其中10例为类风湿性关节炎患者,7例为骨性关节炎患者,6例为行膝关节镜探查术未见异常的病人。2、RT-PCR反转录试剂盒。3、Western印迹杂交相关试剂。二、实验方-法1、RT-RCR实验对病例组及对照组TAK1基因mRNA表达进行检测。2、Western印迹杂交检测病例组及对照组TAK1蛋白的表达水平。3、Western印迹杂交方法检测病例组及对照组TAK1激酶活性差异。结果1、RT-PCR的结果提示TAK1mRNA在类风湿性关节炎病人膝关节滑膜中有明显的表达;在行膝关节镜探查术未见异常的病人滑膜组织中表达最低,有统计学意义(P＜0.05)。2、Western印迹杂交表明TAK1蛋白在类风湿性关节炎病人膝关节滑膜中有明显的表达;在行膝关节镜探查术未见异常的病人滑膜组织中表达最低,有统计学意义(P＜0.05)。3、以磷酸化抗体行Western印迹杂交提示,在类风湿性关节炎病人膝关节滑膜中TAK1的活性较高;在骨性关节炎病人膝关节滑膜中TAK1的活性较低;在行膝关节镜探查术未见异常的病人滑膜组织中TAK1的活性最低,有统计学意义(P＜0.05)。结论1、TAK1基因mRNA和蛋白在类风湿性关节炎病人膝关节滑膜组织中有明显表达,激酶活性较高。2、TAK1基因与类风湿性关节炎发病发生、发展有一定的相关性。