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目的： 探讨MST4、Glud1和Hdgf在联合药物抗大鼠肝纤维化作用中的功能，以及分析MST4、Glud1和Hdgf调控相关信号通路抗肝纤维化作用的分子机制，为联合药物的临床前研究提供初步的药理学基础，为肝纤维化的治疗提供参考。 方法： 1.MST4、Glud1和Hdgf在联合用药抗肝纤维化作用中的功能研究。(1)以HSC-T6为研究对象，分为基因沉默组、阴性空载体组和未转染组。采用慢病毒载体，干扰沉默HSC-T6的MST4、Glud1和Hdgf基因，通过Real-time qPCR与Western Blot验证，选取干扰效率最优的细胞株用于进行下一步实验。(2)CCK-8法分别观察沉默MST4、Glud1和Hdgf基因后，HSC-T6的生长情况，分析MST4、Glud1和Hdgf对HSC-T6增殖的影响。(3)联合药物干预各沉默细胞株，CCK-8法检测各组细胞的药物抑制率，分析联合药物对沉默MST4、Glud1和Hdgf基因后的HSC-T6增殖影响。(4)流式细胞术检测在沉默Hdgf后，HSC-T6的细胞周期与凋亡情况。 2.MST4、Glud1和Hdgf调控相关信号通路抗肝纤维化作用的分子机制研究。(1)MST4基因:Western blot分析沉默MST4后细胞中ERK通路的调控蛋白ERK和p-ERK的表达变化及肝纤维化因子TGF-β1的表达情况。(2)Glud1基因:Western blot分析沉默Glud1后细胞中STAT3通路的调控蛋白STAT3和p-STAT3的表达变化及肝纤维化因子TGF-β1的表达情况。(3)Hdgf基因:Western blot分析沉默Hdgf后细胞中ERK和PI3K/Akt通路的调控蛋白ERK、p-ERK、Akt、p-Akt、MST4、p-MST4以及肝纤维化因子TGF-β1的表达情况。 结果： 1.MST4、Glud1和Hdgf影响HSC-T6生物学行为结果。 (1)MST4、Glud1和Hdgf基因沉默的效率:经Western blot和Real-timeqPCR验证，选出LV-stk26-2、LV-Glud1-1和LV-Hdgf-3细胞株分别作为MST4、Glud1和Hdgf沉默的HSC-T6细胞作后续实验。(2)CCK-8法观察MST4、Glud1、Hdgf-SiRNA对HSC-T6的增殖影响:沉默MST4、Glud1和Hdgf基因，HSC-T6的增殖速度均有减慢的趋势，但无统计学意义。(3)联合药物对HSC-T6(MST4、Glud1、Hdgf-SiRNA)的增殖影响:沉默MST4基因后，联合药物对细胞的抑制作用则无明显改变;Glud1基因后，联合药物对细胞的抑制作用增强，差异具有统计学意义;沉默Hdgf基因后，联合药物对细胞的抑制作用具有增强的趋势，但差异没有统计学意义。(4)联合药物对HSC-T6(Hdgf-SiRNA)的细胞周期及凋亡影响:①与对照组相比，联合药物组S期百分比升高，G1、G2期百分比降低;沉默组S期的百分比降低，G1期百分比升高、G2期百分比无明显改变;沉默+联合药物组，G1期百分比降低，S期百分比升高，G2期无明显改变。②与对照组相比，联合药物组的凋亡明显升高，Hdgf沉默组的细胞凋亡没有明显改变;与联合药物组相比，沉默+联合药物组的凋亡明显减少。 2.MST4、Glud1和Hdgf调控相关信号通路抗肝纤维化作用的分子机制研究结果。 (1)沉默MST4基因:①与对照组相比，沉默组的p-ERK蛋白水平降低，沉默+联合药物组的p-ERK表达降低，并且沉默MST4可以促进联合药物降低p-ERK表达水平，胞内的ERK蛋白表达水平也相应降低。②沉默MST4基因后，TGF-β1的表达降低。联合药物处理沉默细胞株时，TGF-β1表达进一步的降低。(2)沉默Glud1基因:①与对照组相比，沉默组、沉默+联合药物组的p-STAT3蛋白表达降低(P＜0.05)，同时沉默组的STAT3蛋白表达降低(P＜0.05)。②沉默Glud1后，细胞TGF-β1蛋白的表达升高，联合药物作用可降低TGF-β1表达。(3)沉默Hdgf基因:①与对照组(HSC-T6组)相比，沉默组的p-ERK蛋白呈下降趋势，差异没有统计学意义，联合药物组的p-ERK蛋白降低，差异具有统计学意义，与联合药物组相比，沉默+联合药物组的p-ERK蛋白表达进一步下降，而细胞内总ERK蛋白表达水平基本不变。但是，与对照组相比，沉默组的p-MST4蛋白表达呈下将趋势，MST4蛋白的表达水平呈升高趋势。②与对照组相比，联合药物处理可以促进p-Akt和Akt蛋白呈下降趋势，但沉默组的p-Akt无明显改变。③沉默Hdgf后，细胞TGF-β1蛋白的表达升高，联合药物作用沉默组可降低TGF-β1表达。 结论： 1.沉默MST4、Glud1和Hdgf后，HSC-T6的增殖均呈减慢趋势，并且沉默Glud1基因可以增强联合药物对HSC-T6增殖的抑制作用，提示Glud1蛋白在联合用药抑制细胞增殖而抗大鼠肝纤维化作用中可能发挥重要的功能，为关键蛋白，而Hdgf和MST4在其中的功能需进一步研究。 2.联合用药抗肝纤维化作用的分子机理的重要部分可能是通过调控MST4和Glud1，进而调控大鼠肝星状细胞ERK和STAT3信号通路的活化来实现。