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前言多数前列腺癌患者在病程后期其癌细胞获得雄激素非依赖性生长,这成为晚期前列腺癌难以控制的主要原因。目前研究发现,在前列腺癌组织中存在两种类型癌细胞,一类是表达雄激素受体,其在内分泌治疗失败的前列腺癌中仍起着重要作用,许多细胞通过敏化使AR的活性大幅度提高,而获得雄激素非依赖性生长。另一类AR表达丧失。研究发现:AR表达丧失癌细胞的比例越高,前列腺癌预后越差。所以,如能找到同时针对两类前列腺细胞的治疗方法,将对治疗雄激素非依赖性前列腺癌具有重要的意义。目前,有关前列腺癌基因治疗的治疗策略很多。因为多数治疗方法没有较好的特异性,不能直接针对前列腺癌细胞,所以其临床应用有限。目前发现有两种前列腺特异性启动子,即PSA及rPB,两者均含有两个雄激素反应元件(androgen-response element, ARE)及一个雄激素反应区。如应用前列腺特异性启动子,可使前列腺癌基因治疗的病毒载体大量安全的复制扩增,从而达到安全高效的治疗目的。但PSA及rPB只对AR表达阳性的前列腺癌细胞有用,在AR表达阴性的前列腺则无任何作用。我们已经知道无论AR表达阳性及AR表达阴性前列腺癌细胞均有维甲酸受体,因此,我们应用维甲酸反应元件替代rPB内的雄激素反应元件,构建出对雄激素依赖及雄激素非依赖性前列腺癌细胞均有明显作用的改良型rPB-DR启动子,并将其与TK自杀基因相连接,以腺病毒作为载体研究其对前列腺癌细胞的杀伤作用。第一部分含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定目的:构建含rPB-DR启动子和TK自杀基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为前列腺癌基因治疗的研究奠定基础。方法:应用分子克隆技术,将rPB-DR启动子连接至pBluescript SK-TK上构建出pBluescript SK-rPB-DR-TK,再酶切出rPB-DR-TK目的片断,并将其连接至穿梭质粒pShuttle上。将构建好的pShuttle-rPB-DR-TK经Pme I酶切线性化后再以电穿孔法转化至感受态细菌E. coli BJ 5183-AdEasy-1内进行同源重组,抽提质粒经卡那抗性筛选