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本研究采用组织块贴壁培养法对毛脚鵟不同组织的细胞进行了原代和传代培养,获得了三种不同组织来源的细胞系,并对细胞系体外培养条件和生物学特性进行了分析。 在细胞传代培养过程中,本研究对比分析了三种组织来源细胞的形态学、生长曲线、贴壁率、核型等一系列生物学特性。结果显示,在细胞形态学方面,三种来源细胞均为成纤维型细胞。对于三种组织来源细胞的贴壁能力分析显示,输卵管源细胞最强,肺源细胞和气管源细胞次之。通过绘制细胞生长曲线,三种不同组织来源细胞的倍增时间分别为29.91±0.39h、33.18±0.21h、30.67±0.28h,细胞群体倍增次数分别为3.54±0.01、4.52±0.02、4.38±0.03。毛脚鵟细胞的染色体数目为2n=68,性染色体为典型的ZW型,具有5对形态不能辨别的微小染色体。 本项研究针对毛脚鵟肺源细胞的体外培养,分析了培养液、消化液、血清、胰岛素、肌苷等一系列因素对细胞生长增殖的影响。用4种不同的基础培养液(DMEM(高糖)、DMEM/F12、M199、MEMalpha)分别对细胞进行培养,结果显示MEMalpha对毛脚鵟肺源细胞的培养效果最好,为毛脚鵟细胞体外培养最适培养基。用3种不同消化液(0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA、0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA)对传代细胞进行消化处理,结果表明,在同样的消化时间内0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化效果最好。通过比对不同血清中毛脚鵟肺源细胞的生长状况,研究发现毛脚鵟肺源细胞具有血清依赖性,含12%血清的培养基中培养为宜。在毛脚鵟细胞培养过程中,向培养体系中添加适当浓度的胰岛素、肌苷可以促进细胞的生长,但是高浓度的肌苷却能抑制细胞的生长。研究对比了4种不同冻存保护剂对细胞保护的影响,结果显示,10%DMSO+80%DMEM/F12+10%血清的冻存剂对细胞的保护效果最好。 本研究可为今后毛脚鵟细胞利用、遗传信息的保存及生物学特性的深入研究提供实验材料和依据。