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为研究以重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白（rChIL-6-Linker-ChIL-2，重组融合蛋白）为主要成分的鸡基因工程复合免疫增强剂，本研究分别进行了重组融合蛋白在鸡体内外生物学活性、以及不同剂型的重组融合蛋白对不同种类疫苗的免疫增强作用研究。采用 ELISA方法分别检测重组融合蛋白在体外与抗 ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应活性，采用 MTS方法分别检测重组融合蛋白体外促 T、B淋巴细胞增殖活性。进行了不同浓度（原液、1:8、1:32、1:64倍稀释）的重组融合蛋白在体内活性比较研究；采用筛选出的1:8倍稀释的重组融合蛋白、1:8倍稀释的单一 rChIL-6/rChIL-2蛋白对照、1:4倍稀释的 rChIL-6和rChIL-2蛋白等体积混合物对照分别接种于28日龄 SPF鸡，进行体内活性比较研究；分别采用MTS法、流式细胞术和ELISA方法检测以上各组试验鸡接种前后不同时间外周血中 T/脾脏 B淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+ T淋巴细胞的百分含量及血清中 Th1/Th2型细胞因子表达水平等指标，根据以上指标评价不同蛋白的体内活性。 在以上研究基础上，将1:8倍稀释的重组融合蛋白水剂与 NDV（ LaSota株）活疫苗接种于28日龄 SPF鸡，分别采用 MTS法、流式细胞术、ELISA方法和 HA/HI的方法检测接种前后不同时间各组鸡 T/B淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+ T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及 NDV免疫抗体水平等指标；将1:8倍稀释的重组融合蛋白水剂与NDV灭活疫苗分别同时种于35日龄的 SPF鸡，重组融合蛋白与 NDV（LaSota株）混合冻干后分别采用点眼滴鼻和肌肉注射方式接种114日龄的 SPF鸡，重组融合蛋白水剂和冻干剂与重组禽流感病毒（H5 Re-6/Re-7）二价灭活疫苗分别同时接种于140日龄鸡，采用 HA/HI的方法检测以上不同实验组鸡的 NDV或AIV（H5 Re-6/Re-7）免疫抗体水平。 结果：重组融合蛋白在体外可以和抗 ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应，其ChIL-6、ChIL-2相对含量分别为59.56 pg/mL、53.44 pg/mL；稀释度≤1:8的重组融合蛋白在体外刺激 T、B淋巴细胞增殖活性显著高于 ConA对照组，与原液差异不显著；当稀释度>1:8时，重组融合蛋白体外活性随浓度的降低而下降。1:8倍稀释的重组融合蛋白的体内活性(刺激 T、B淋巴细胞增殖，提升鸡外周血中CD3+CD4+、CD3+CD8+ T淋巴细胞的百分含量及血清中Th1、Th2型细胞因子表达水平等)高于1:32、1:64倍稀释，与原液差异不显著；相同浓度的重组融合蛋白在体内的生物学活性高于单一的 rChIL-6、rChIL-2蛋白对照，且与蛋白混合物组差异不显著。1:8倍稀释的重组融合蛋白水剂刺激 T、B淋巴细胞增殖，提升鸡外周血中 CD3+CD4+、CD3+CD8+ T淋巴细胞的百分含量、血清中 Th1/Th2型细胞因子表达水平及 NDV活疫苗免疫抗体水平等均高于 NDV疫苗对照和相同稀释度的 rChIL-6/rChIL-2对照，与蛋白混合物组差异不显著；与 NDV活疫苗对照组相比，同时接种重组融合蛋白水剂和疫苗组，免疫后7 d~42 d可提高1.0~1.9个NDV抗体HI滴度；分别较rChIL-6、rChIL-2对照组提高0.2~0.7、0.2~1.1个滴度。与 NDV灭活疫苗对照组相比，接种重组融合蛋白水剂后14 d~49 d，可提高0.8~1.3个NDV抗体HI滴度；分别较rChIL-6、rChIL-2对照组提高0.4~0.9、0.4~1.1个滴度。采用点眼滴鼻方式接种重组融合蛋白与NDV（LaSota株）混合冻干剂后14 d~63 d可提高NDV抗体HI滴度0.8~2.9个，其免疫增强作用显著优于肌肉注射方式。与AIV（H5 Re-6/Re-7）二价灭活疫苗对照组相比，重组融合蛋白水剂、冻干剂与二价灭活疫苗共接种后14 d~35 d可分别提高AIV（H5 Re-6）免疫抗体0.6~1.5、0.1~0.9个滴度，可分别提高AIV（H5 Re-7）免疫抗体0.4~1.3、0.5~1.5个滴度。 结论：重组融合蛋白在鸡体内、外均具有良好的生物学活性，其体内外活性具有一定的相关性；重组融合蛋白在体内、外发挥了 ChIL-6、ChIL-2双重生物学活性；重组融合蛋白水剂在体内对不同种类疫苗均具有免疫增强作用，重组融合蛋白冻干制剂与水剂对疫苗的免疫增强作用无明显差异；重组融合蛋白与疫苗共同冻干剂对鸡体的免疫增强效果与接种方法相关，采用点眼滴鼻方式接种后免疫效果明显优于肌肉注射；重组融合蛋白在机体内通过刺激 T/B淋巴细胞增殖、提高CD4+/CD8+的比值、提高外周血中Th1、Th2型细胞因子的表达水平等方式发挥细胞免疫和体液免疫，从而进一步提高机体的特异性免疫抗体水平。 本研究揭示了重组融合蛋白在机体内外均发挥 ChIL-6、ChIL-2协同生物学活性的机理，为研究以重组融合蛋白为主要成分的免疫增强剂产业化生产及应用奠定了基础。