鲜蒲公英(冻干)饮片制备及清热解毒、消肿通淋药效研究

来源 :河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luohuixian11
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目的:通过低温冷冻干燥技术制备鲜蒲公英(冻干)饮片,建立最佳制备工艺;对比鲜蒲公英及不同加工品对耳廓肿胀、阳性疮疡及前列腺增生动物模型的药效,探讨冻干品、晒干品以及鲜蒲公英三者药效差异。方法:制备鲜蒲公英(冻干)饮片,建立鲜蒲公英冻干饮片最佳工艺参数:检测不同冻干条件下鲜蒲公英饮片性状、水分、浸出物,采用薄层色谱法(TLC)进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)对菊苣酸成分进行含量测定。比较不同制备条件下菊苣酸成分含量,选择最佳条件,制备鲜蒲公英(冻干)饮片。小鼠右耳涂抹二甲苯建立小鼠耳廓肿胀模型,分为空白组,模型组,阿司匹林组(75.00 mg/kg),鲜蒲公英高、低剂量组(20.10 g/kg、10.05 g/kg),蒲公英冻干高、低剂量组(3.09 g/kg、1.55 g/kg),蒲公英晒干高、低剂量组(3.75 g/kg、1.88 g/kg),每组12只。给药体积均为0.2 ml/10g,每天灌胃给药1次,连续给药7天,空白组与模型组给与生理盐水。第7天给药30min后造模,空白组涂抹生理盐水,其余各组小鼠右耳均匀涂抹20μl二甲苯(正反面涂抹,各10μl),30min后再次涂抹致炎,左耳不进行处理,作为对照。30 min将小鼠处死,观察小鼠耳廓肿胀度和耳廓肿胀抑制率。大鼠后背注射金黄色葡萄球菌建立大鼠阳性疮疡动物模型,分为空白组,模型组,夫西地酸组(0.19g/只),三黄膏组(0.19g/只),鲜蒲公英高、低剂量组(1.50g/只、0.75g/只),蒲公英冻干高、低剂量组(0.23g/只、0.11g/只),蒲公英晒干高、低剂量组(0.28g/只、0.14g/只),每组12只。给药组敷相应药物,模型组和空白组敷吸附0.9%氯化钠注射液的药棉,敷药后用玻璃纸覆盖,固定。每天保持疮疡部位与药物接触时间6h。每天给药一次,连续给药10d。实验过程中每天记录大鼠状态、体重变化,对大鼠疮疡局部皮肤创面评分。第10d给药后1h后,检测血清中溶菌酶、IL-1和IL-6水平;取大鼠疮疡局部皮肤制备匀浆,检测皮肤匀浆溶菌酶、IL-1、IL-6、EGF和b FGF水平;取大鼠疮疡局部皮肤,固定、切片、染色,镜检局部皮肤病理变化。去势法联合皮下注射丙酸睾酮建立大鼠前列腺增生模型,空白组与模型组灌胃等量的生理盐水,非那雄胺组(0.83 g/kg),鲜蒲公英高、低剂量组(13.4 g/kg、6.7 g/kg),蒲公英冻干高、低剂量组(2.06 g/kg、1.03 g/kg),蒲公英晒干高、低剂量组(2.50 g/kg、1.25 g/kg)。每天给药一次,连续给药30天。每周称量体重一次,根据体重调整用药量。每日观察记录各组大鼠表观指标(毛色、精神状态等)。最后一次给药后1h后,检测大鼠血清中EGF、b FGF、TGF-β、COX-2和i NOS水平;处死大鼠,解剖,取前列腺,称重,计算大鼠前列腺指数;一半前列腺制备匀浆,检测匀浆中E2、T、IL-6、TNF-α、GSH、SOD水平;另一半前列腺固定,包埋、切片、HE染色,镜检前列腺组织病理变化。结果:通过对不同冻干条件下鲜蒲公英(冻干)饮片性状、水分、浸出物、定性鉴别、定量测定,最佳冷冻干燥工艺为真空度0.2 mbar,干燥温度-50℃,冷冻时间48 h。建立小鼠耳廓肿胀模型成功;与模型组相比,鲜蒲公英及不同炮制品组均可明显减轻小鼠耳廓肿胀度。建立大鼠阳性疮疡模型成功;与模型组相比,鲜蒲公英及不同炮制品组均可促进大鼠创面愈合;升高大鼠血清LZM水平,降低大鼠血清中IL-6和TNF-α水平;明显升高大鼠创面皮肤组织中LZM、EGF和b FGF水平,明显降低大鼠创面组织中IL-1、IL-6水平;并可以明显改善大鼠创面皮肤病理变化。建立大鼠前列腺增生模型成功;与模型组相比,鲜蒲公英及不同炮制品组均可明显降低前列腺湿重、前列腺指数;可显著或者明显降低大鼠血清中EGF、b FGF和COX-2水平,升高大鼠血清中TGF-β、i NOS水平;可明显降低大鼠前列腺组织中E2、T、IL-6、TNF-α水平,明显升高大鼠前列腺组织中GSH、SOD水平;明显改善大鼠前列腺增生组织细胞的形态。结论:1.鲜蒲公英(冻干)饮片的最佳工艺条件为0.2 mbar,干燥温度-50℃,冷冻干燥时间48h。2.通过开展小鼠耳廓肿胀动物实验、大鼠阳性疮疡动物实验、大鼠前列腺增生动物实验,验证鲜蒲公英及不同炮制品清热解毒、消肿通淋的功效。3.通过进行组间对比,结果表明鲜蒲公英组与蒲公英晒干组具有统计学差异,鲜药药效最好;通过蒲公英冻干组与晒干组相比较,蒲公英冻干组较晒干组药效较好,但因为鲜药不易保存、临床应用受限,而通过蒲公英冻干饮片可作为鲜蒲公英的最佳替代品,临床用于相关疾病治疗。
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