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脊髓背角浅层(Ⅰ层和Ⅱ层)，尤其是Ⅱ层(又称胶状质)是接受无髓和薄髓初级传入纤维传递的外周伤害性信息及来自中枢内源性痛抑制系统投射纤维传递的痛抑制信息的主要部位，胶状质主要由局部环路神经元构成。延髓背角(又称三叉神经脊束核尾侧亚核)和脊髓背角在结构和功能上相似，在面口部伤害性信息的传递和调控过程中发挥重要的作用。 γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)是哺乳动物中枢神经系统内主要的抑制性神经递质。中枢内约50％的突触以GABA作为递质，通过其特异性受体介导，在控制神经元的兴奋性方面发挥着重要作用。GABA受体有三种：GABA_A，GABA_B和GABA_C受体，GABA_A和GABA_C受体是配体门控氯离子(Cl~-)通道。GABA_B受体是G-蛋白耦联受体。免疫组化研究显示GABA阳性神经元、纤维和终末，GABA_A和GABA_B受体均密集地分布于脊髓和延髓背角浅层，GABA_C受体主要分布于视网膜，在脊髓和延髓中则没有分布。 大量研究证实GABA在脊髓和延髓背角伤害性信息的传递和调控过程中发挥重要的作用。在脊髓和延髓背角，GABA通过抑制初级传入纤维在脊髓和延髓背角释放谷氨酸(Glu)和P物质(SP)而抑制外周伤害性信息传递(突触前机制)。但关于GABA通过突触后机制调控脊髓和延髓背角内伤害性信息的传递的研究(尤其是形态学方面的研究)还不够充分，需要进一步充实和完善。 根据以往的形态和机能学研究推测，在背角浅层，含Glu或SP的初级传入终末可能将伤害性信息直接传递给GABA能神经元，这些抑制性中间神经元再抑制接受伤害性信息的兴奋 第四军医大学博士学位论文性投射神经元及中间神经元的活动，从而参与对脊髓和延髓背角伤害性信息传递的调控。但尚缺乏GABA ＆背角浅层内百按抑制接受外周伤害性信息的背角浅层神经元的形态学证据。 以往的生理学研究也提示来自中枢内源性抑制系统的5－羟色胺（5－HT）和去甲肾上腺索 （NE）可能先激活部分延髓背角胶状质层的GABA和／或甘氨酸能中间神经元，这些中间神经元释放出来的GABA和／或甘氨酸再对兴奋性投射神经元和中间神经元发挥抑制作用。但上述结果尚缺乏形态学证据的证实。 在脊髓背角浅层神经元，我们曾利用膜片钳全细胞记录技术观察到GABA通过激活＊AS幻受体可直接诱发出C！－电流，单独给予5－＊T或NE均不能诱发出抑制性夹触后屯流，但5－HT或NE可分别通过激活5－HTZ受体或q受体经胞内PKC或PKA信号转导途径增强GABA诱发的夹触后电流。但在脊髓背角浅层神经元内与GABA大量共存的阿片肋对GABA诱发的电流的调拄作用尚缺乏具体的研究。 本论文利用膜片钳全细胞记录技术、免疫荧光三重标记和免疫电镜双重标记技术着重研究了以GABA为主的抑制性神经活性物质在脊髓和延髓背角发拼抑制性作川的机制及相关的调控机理。本论文包括以十三方面的研究内容：1、大鼠延髓背角内SHT、脑叫敝、GABA、甘氨酸或SP能终末与钙结合蛋白阳性神经元间的联系 CB（cathendin－D28k），CR（calretinin）和 PV（parvalbulnin）是二种最常见的钙结合蛋白（。ale山m七indng proteins，CaBPs）。本研究首先观察了面口部给予伤害性刺激诱发人鼠延髓背角神经元内FOS i白的表达情况；然后通过抡疫荧光组化染色观察了这些神经元是否含＊aB Ps（＊B、＊R和PV）：最后通过抡疫荧光多重标记和免疫屯镜技术观察了5．HT、口ABA、甘氨酸转还体二（glycinetransporterZ，GlyTZ）和脑啡肽（enkephalin，ENK）以及SP能阳性终末与 CaBPs／FOS双标神经元间的联系。在光镜下可观察到：①FOS阳性神经元在延髓背角各层均有分布，以＊层最为密集；②大多数 CB、CR或 PV阳性神经元位于＊层，余者分布在 1层和Ill层；③5－HT、GABA、GlyTZ，ENK及 SP pl性纤维和终末也主要位于延髓背角1层和＊层；④部分 FOSml性神经元也呈 CB、CR或 PV州性；⑤5－HT、GABA、GlyTZ成ENK阳性终末分别与 FOS／CB、FOS／CR或 FOS／PV ／X标神经元形成密切栓触：③SP pll性终末与5－HT、GABA、GlyTZ或ENK阳性终末同时与CB、CR或PV川性神经元形成密切按触。在电镜下观察到5－HT、GABA、GIyTZ或ENK NJ性终末与CB、CR或PV ml性神经元 4 第四军医大学博士学位论文主要形成对称型（抑制性）夹触联系。上述结果提示5－HT、GABA、甘氨酸或ENK可能通过抑制延髓背角内含钙结合蛋白的伤害性感受神经元实现调V面口部伤害性信息的传递。2、大鼠延髓背角内5－HT阳性终末与S－HTZ＾受体和GABA或甘氨酸共存神经元的联系 应用 5－HT／5－HTZ＾受体（5－HTZ＾R）／GABA及 5－HT／5－HTZ＾R／tr氨酸的兔疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察了大鼠延髓背角内5爿T阳性终末与5－HTZ＾R／GABA或5－HTZ＾R／甘氨酸共存神经元间的联系。结果表明：①5－HT阳性纤雏和终末主要分布于背角浅层（I、11层）：②5－H