萍乡红鲫Hira基因及其启动子的特征和在卵巢周年发育中的研究

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萍乡红鲫(pingxiang red-transparent crucian carp, curassius auratus var. pingxiangnesis),通体透明,体呈肉红色,是江西省萍乡地区分布的一种天然三倍体野生鲫鱼的突变种。在2008年被国家水产原、良种委员会审定为一个新的养殖品种。经过连续多代人工选育,得到生长速度快、适应性强、营养价值高、易养易繁、抗病力强等优良经济性状,且遗传性状基本稳定的后代。现已证实萍乡红鲫具有两性生殖和雌核发育两种生殖方式。在对银鲫、果蝇等一些生物的研究中,Hira基因在雌核发育中与精核解凝有关。实验从三个方面对萍乡红鲫Hira基因做了相关工作,以探讨其在萍乡红鲫生殖调控中的作用。一、实验采用RACE-PCR技术克隆得到萍乡红鲫Hira基因cDNA全长,序列全长为3851bp,开放阅读框3033bp,编码1010个氨基酸。通过氨基酸序列比对,同源分析发现Hira基因存在较大的种属特异性和稳定性。萍乡红鲫HIRA蛋白与银鲫、普通鲫鱼及斑马鱼的HIRA蛋白同源性较高,与两栖类、爬行类、鸟类以及哺乳类动物的HIRA蛋白同源关系较远。信号肽分析表明Hira基因无信号肽,推测HIRA蛋白可能为可溶性蛋白于细胞质基质或进入细胞核发挥功能,符合其作为组蛋白伴侣而行使调控基因转录的特性。二、利用Genome Walker法进行Hira基因启动子的步移,经过2次步移,测序后MEGA软件拼接得到启动子序列3.6kb。Proscan软件分析表明在Hira基因翻译起始位点ATG上游-1278bp~-1035bp段可能为基因的强启动区,含有1个TATA-BOX,1个CAATBOX,1个EBOX和一个POU1Fla,这些结构域序列可能对于Hira基因的表达,起到了重要的调控作用。三、利用荧光定量PCR方法检测了Hira基因在萍乡红鲫自出苗后至性腺成熟的成体鱼的卵巢组织中的表达变化情况。结果显示,Hira基因在卵巢组织中表达的周年内总体表现为上升趋势,出苗后1~5月龄表达量较小,在第6月龄突然增加,相对量达到3月龄时的1947倍,之后急剧减少。第7月龄~第10月龄,Hira基因的表达量相对第6月龄时表现为急剧减少趋势。第11月龄时又突然增加到全年中表达量最大值,为出苗后半月龄的3383倍,之后在第12月龄时又有减少情况。
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