大丽轮枝菌是一种典型的土传病原真菌,寄主范围广泛。微菌核是大丽轮枝菌的主要休眠结构,抗逆性强,可在没有寄主的情况下存活14年,这与其体内含有丰富的黑色素密切相关。黑色素是一种由酚类或吲哚类化合物组成的带有负电荷的疏水性高分子聚合物,能够保护真菌免受环境和寄主的影响。漆酶是黑色素合成通路中的关键酶,在真菌生长发育的过程中发挥着重要的作用。本文通过农杆菌介导的遗传转化和PEG介导的原生质体转化方法对大丽轮枝菌中的漆酶基因VdLac进行了敲除和互补,研究漆酶基因在大丽轮枝菌中的主要功能。结果如下:1.根据NCBI上已公布的VdLs.17的基因组序列,克隆得到漆酶基因VdLac序列,VdLac基因全长1978 bp,c DNA序列全长1713 bp,编码570个氨基酸。2.利用农杆菌介导的遗传转化方法(ATMT)对VdLac进行敲除,并通过潮霉素抗性筛选和PCR检测确定阳性敲除突变体,获得了4个敲除突变体。3.通过PEG介导的原生质体转化方法将互补质粒随机插入到敲除突变体中,经G418抗性筛选和PCR检测确定了1株阳性互补突变体。4.通过对敲除和互补突变体进行一系列的生物学功能测定,分析漆酶基因的功能。结果表明,VdLac基因缺失突变体对硝化压力更敏感,其在CM培养基上仍可产生漆酶,但产生漆酶的能力有所降低;VdLac基因不影响菌株的营养生长、产孢能力、致病力以及黑色素合成。