Bc1-2是在多种恶性肿瘤中高表达的抗凋亡基因，它的高表达是肿瘤细胞对各种凋亡诱导剂不敏感的主要原因之一，因此Bc1-2基因是反义寡核苷酸治疗恶性肿瘤的良好靶基因。 F951是我所自行设计合成的与其它反义寡核苷酸序列不同的针对Bc1-2基因mRNA的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸。为了研究F951在治疗恶性肿瘤方面的临床应用价值，本课题选择高表达Bc1-2基因的人Burkitt’s淋巴瘤细胞CA46为受试对象，研究F951及F951联合Ara-c对CA46细胞生物学特性的影响；选择CA46细胞裸鼠移植瘤模型为受试对象，研究F951及F951联合小剂量阿糖胞苷(Ara-c)在小鼠体内治疗人恶性淋巴瘤的药效学；用~3H标记F951，研究F951在BALB／c小鼠体内的药代动力学过程；在体外研究CA46细胞对F951的摄取及F951在CA46细胞内的分布情况。通过这些研究初步评价F951在治疗恶性肿瘤方面的临床应用前景，为F951进入临床试验提供实验研究数据。 1．F951对CA46细胞的作用 实验设四组，依次为未处理组、FNS18 15μM无义对照组、F95115μM治疗组、F951 15μM+Ara-c2μM联合治疗组。结果表明，F951能特异性地抑制CA46细胞的生长和增殖，用药后细胞生长曲线平缓，与Ara1表现出一定的联合协同趋势；而FNS18无义对照组与未处理组相比，细胞的生长和增殖无明显的改变。用药72小时后的MTT结果表明，相对于未处理组，FNS对照组、F951组和F951＋Ara＊组细胞的抑制率分别为2．06巩38．26％和55．10儿三者之间有显著性差异（P＜0．05）。用药24小时后，荧光定量RT－PCR检狈到F951组和F951＋Ara－c组细胞中仇－2 InRN水平明显下降，与未处理组相卜下降达50％以上；而FNS18对照组与未处理组相比无明显变化。用药48小时后，用流式细胞仪检测到未处理组、FNS对照组、F951组和F951十Ara一c组细胞Be12 蛋白阳性率分另为gi．49％、80．14％、67．11％和41．77儿进一步用原位凋亡TUNEL试剂盒和线粒体凋亡试剂盒检测早期凋亡细胞，结果表明，F951组和 F951＋Ara1组的细胞凋亡率明显高于未处理组和 FNS对照组。 从结果中发现，F951能特异性地抑制CA46细胞的生长和增殖，诱导细胞凋亡，并与Ara1表现出一定的协同趋势，这种作用是通过反义机制特异性地抑制BC12基因表达，下调仇士 InRNA和蛋白质水平，使线粒体跨膜电位减小实现的。 2．F951治疗人Burkitt七淋巴瘤细胞CA46裸鼠移植瘤的药效学研究 把高致瘤性CA46细胞接种于经环磷酚胺免疫抑制过的裸鼠皮下制作移植瘤模型，待注射部位长出肉眼可见的瘤块后随机分为四组，每组5只，依次为NS对照组、FNS18 10。g／kg无义对照组、F951 10mg／kg 2治疗组和F951 10mg八g功ra1 呷八g联合治疗组。瘤体局部注射给药，每日一次，共治疗ZI大。 在治疗过程中，NS对照组和 FNS无义对照组的瘤块进行性增大，F95治疗组的瘤块在治疗开始的第一周内略有增大后即开始进行性缩小，F951＋Ara＊联合治疗组的瘤块一开始治疗就进行性缩小。以测量的瘤块体积作为比较指标，两个对照组之间始终无显著性差异b0．05入 两个治疗组之间也无显著性差异b川．05入F951治疗组在治疗14天后分别与两个对照组相比均出现显著性差异b④．05）；而早在治疗第7大时，F95爪rat组与FNS18对照组之间就出现了显著性差异bm．05厂 在治疗第14大后，两个治疗组与两个对照组之间均有显著性差异b狈．05厂治疗ZI天后处死小鼠，剥离完整瘤块称重。两个对照组瘤重之间无显著性差异b＞0．05八两个治疗组瘤重相比也无显著性差异k川．05）；两个治疗组分别与两个对照组相比均有显著性差异＊刃．of儿相对于NS对照组的瘤重，FNSIS无义对照组、F951治疗组和 F951吨ra＊联合治疗组的抑瘤率分别为29．5％、88．4％和88．0％。显示出F951单用或与小剂量Ara－c联合应用均有良好的治疗效果。瘤块病理学检查可见，两个治疗组瘤体内瘤细胞分布稀疏，有大片的变性坏死灶，结缔组织增生，纤维化明显；而两个对照组瘤体内瘤细胞呈弥漫性密集分布，并且向邻近骨骼肌内浸润性生长，无变性坏死和纤维化现象。用荧光定量RT干CR检测瘤细胞内 BC七基因 InRNA的水平，结果显示 NS对照组和 FNS无义对照组瘤细胞内仇－2 InRN的平均拷贝数分别为5930．96和6785．89； 3F951治疗组和F951地ra1联合治疗组瘤细胞内h七 mRNA的平均拷贝数明显下降，分别为589．89和783．34。流式细胞仪检测到四组瘤细胞仇－2 蛋白的阳性率依次为84．56％、sl．81％、56．95％和37．09见两个治疗组的阳性率明显降低。用透射电镜观察瘤组织超微结构，NS对照组和 FNS无义对照组瘤细胞密集，各种亚细胞结构完整，细胞浆内核糖体和内质网丰?