【摘 要】
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目的:检测富含半胱氨酸分泌蛋白1（CRISP1）在人精子表面的定位及其在正常精液和弱精子症、少精子症、少弱精子症患者精液中的表达水平,探讨CRISP1在受精过程中在人精子表面的定位改变情况以及CRISP1的表达水平与人精液质量的关系;对IVF不同受精结局患者获能精子表面CRISP1的表达水平进行检测,探讨人CRISP1的表达水平对IVF受精结局的影响。方法:制备受精过程中获能前、获能后及发生顶体反
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目的:检测富含半胱氨酸分泌蛋白1（CRISP1）在人精子表面的定位及其在正常精液和弱精子症、少精子症、少弱精子症患者精液中的表达水平,探讨CRISP1在受精过程中在人精子表面的定位改变情况以及CRISP1的表达水平与人精液质量的关系;对IVF不同受精结局患者获能精子表面CRISP1的表达水平进行检测,探讨人CRISP1的表达水平对IVF受精结局的影响。方法:制备受精过程中获能前、获能后及发生顶体反应后的精子,通过间接免疫荧光检测人CRISP1在不同状态精子表面的定位。收集2016年～2018年于武汉大学人民医院生殖医学中心行精液分析的男性患者的精液,根据第五版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》标准化分析结果,将患者分为正常精液组、弱精子组、少精子组和少弱精子组,通过PCR及Western Blot检测精液中CRISP1的表达水平,比较不同质量精液中CRISP1的表达差异,探讨CRISP1的表达水平与人精液质量的关系;收集2016年～2018年于武汉大学人民医院生殖医学中心行IVF-ET助孕治疗的男性患者的精液,排除卵母细胞质量及精液质量的影响,根据短时受精结果分为正常受精组及受精障碍组,通过PCR及Western Blot检测两组患者获能精子表面CRISP1的表达水平,比较IVF不同受精结局患者获能精子表面CRISP1的表达差异,分析获能精子表面CRISP1表达水平对IVF受精结局的影响。结果:1、间接免疫荧光结果显示,在未获能情况下,CRISP1分布于整个精子表面。精子获能后,精子头部CRISP1的荧光信号减少。精子发生顶体反应后,精子尾部CRISP1荧光信号消失,且荧光信号均集中在了精子头部赤道段及赤道段前端区域。2、在正常精液、弱精子症精液、少精子症精液、少弱精子症精液的精子中均检测到CRISP1的m RNA水平和蛋白水平的表达,4组精液中CRISP1 m RNA水平无明显差异,而不同质量精液中CRISP1蛋白表达水平差异显著。弱精子症患者和少弱精子症患者CRISP1表达水平均低于精液正常患者,少弱精子症患者CRISP1表达水平也低于少精子症患者;少精子症患者CRISP1表达水平与精液正常患者相比无差异,少弱精子症患者和弱精子症患者相比CRISP1表达水平也无差异。3、行IVF短时受精的患者中,受精障碍组患者获能精子CRISP1蛋白水平显著低于正常受精的患者。结论:1、CRISP1在受精过程中定位会发生改变,初步展示了它参与到精卵相互作用中的行为过程,为进一步揭示CRISP1参与受精的作用机制奠定了基础。2、人CRISP1的表达与精子浓度无关,但在PR异常时,CRISP1蛋白表达水平较正常精液显著降低,提示CRISP1可能通过CRD结构域对精子膜上的重要Ca2+通道Cat Sper进行调节,从而增强了未获能精子的前向运动,但具体的分子机制还需要进一步研究。3、IVF受精障碍患者的获能精子表面CRISP1水平显著降低,获能精子中CRISP1的蛋白水平可能影响了IVF中精子的受精过程,获能精子上CRISP1缺陷可能导致IVF受精失败,进一步说明了与精子表面紧密结合的CRISP1在精卵相互作用过程中的重要影响。4、与精子表面紧密结合的CRISP1在受精过程中发挥了重要作用,可以通过在精子表面发生迁移改变定位,参与精子与卵子的相互作用,影响IVF受精结局。获能精子表面的CRISP1水平可能成为IVF受精结局的预测指标,帮助临床选择ART治疗方法。但获能精子表面CRISP1对受精结局的预测价值还需要大量的研究进行探索。
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