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第一部分一种新来源的内皮祖细胞提取分离方法目的:探索一种新来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的提取分离方法,以增加EPCs细胞数量、提高增殖活性。方法:拟从胎鼠肺提取分离培养EPCs,分别从形态学、表面标志物、吞噬功能和体外管腔形成等方面验证所提取细胞为EPCs。同时将其与骨髓中提取的内皮祖细胞的细胞增殖活力进行比较。结果:从胎鼠肺提取分离培养的细胞,其形态特征与EPCs一致,细胞表达CD31、CD34、CD133、VEGFR2等EPCs特异标志物,可同时吞噬Dil标记乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和FITC标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I);体外可形成管腔样结构,功能上符合EPCs的表现。胎鼠肺提取的细胞增殖活力明显高于传统从骨髓提取的EPCs。结论:胎鼠肺中可提取出数量和质量较好的EPCs,为进一步实验提供可靠的细胞来源。第二部分SIRT6对B细胞发育及BCR信号的影响目的:探索SIRT6对B细胞发育及BCR信号的影响,并进一步发现其机制。方法:构建SIRT6f/f CD2iCre小鼠(条件性基因敲除鼠)模型,并Real-time PCR检测其SIRT6 RNA水平及蛋白质免疫印迹实验检测SIRT6蛋白水平表达情况。以野生型(WT)小鼠和SIRT6f/f CD2iCre小鼠为模型,分别提取其骨髓细胞、脾脏淋巴细胞用流式细胞术进行染色观察两种鼠B细胞亚群的差异,以此来观察SIRT6对B细胞发育的影响。以WT小鼠和SIRT6f/f CD2iCre小鼠为模型,分别提取其脾脏B细胞,以BCR-(Fab)2-SA结合在37℃水浴激活来模拟体内BCR激活过程,使用激活后的B细胞提取蛋白,进行蛋白质免疫印迹实验,以此来观察BCR信号相关分子变化。结果:相较于WT鼠,SIRT6f/f CD2iCre小鼠B、T细胞内SIRT6RNA水平表达降低,B细胞内SIRT6蛋白水平表达降低,T细胞内SIRT6蛋白水平表达降低不明显。在SIRT6f/fCD2iCre小鼠中晚期preB、未成熟B细胞所占比增加而循环成熟B细胞所占比降低。在SIRT6f/fCD2iCre小鼠中MZ-B细胞占总B细胞比例降低,而GC-B细胞占总B细胞比例升高,Fo-B细胞所占比例无明显变化。SIRT6f/f CD2iCre小鼠p CD19信号增强且降解延迟,p SHIP信号降低。结论:SIRT6缺乏导致在骨髓中B细胞发育停滞于晚期pre-B、未成熟B细胞阶段,从而导致循环成熟B细胞降低。SIRT6缺乏还可能导致短期内的抗体生成减少但增强记忆性体液免疫反应和长期抗体的生成且SIRT6缺乏增强了B细胞激活。