论文部分内容阅读
目的：探究石菖蒲对大鼠血视网膜屏障紧密连接蛋白调控机制及其对血视网膜屏障通透性的影响，并评价药物安全性，以此验证中药引经理论。
方法：实验包括2部分，第1部分：石菖蒲对大鼠血视网膜屏障用药安全性的研究检测。取20只成年健康SD大鼠，随机分为4组，每组5只：对照组(生理盐水1ml/kg)、石菖蒲低剂量组(0.1g/kg)石菖蒲中剂量组(0.3g/kg)，石菖蒲高剂量组(0.6g/kg)，连续灌胃30天。采用苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin-stained,HE)、光学相干层析技术(Optical Coherence tomography, OCT)观察视网膜结构，评价药物安全性。第2部分：取36只成年健康SD大鼠，随机分为4组，每组9只：对照组(生理盐水1ml/kg)、石菖蒲低剂量组(0.1g/kg)石菖蒲中剂量组(0.2g/kg)，石菖蒲高剂量组(0.3g/kg)，连续灌胃7天。采用伊文思蓝(Evan blue，EB)定量测定、Westernblot实验蛋白浓度测定、RT-PCR检测视网膜p38MAPK信号通路mRNA表达水平，以此评估石菖蒲对视网膜血管通透性的影响。
结果：
1.低剂量组与正常对照组对比厚度差异可忽略不计，中剂量组、高剂量组对比正常对照组视网膜厚度稍有增加，但未超出正常范围。均未见有视网膜异常病变。
2.对照组视网膜组织结构正常，石菖蒲不同剂量组视网膜毛细血管内皮细胞厚薄不等，细胞间隙组织疏松，胞质内部吞饮小泡增多，毛细血管管腔不规则，基膜仍然完整，但未见视网膜组织水肿、细胞空泡、胞体增大、核浓缩和炎症细胞浸润等病理性损害。对照组未见EB渗漏，石菖蒲不同剂量组均呈现不同程度的EB渗漏，且随剂量的增加EB渗漏越明显。
3.石菖蒲不同剂量组EB含量显著高于对照组，石菖蒲中高剂量组EB含量显著高于低剂量组，实验组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.01)。
4.石菖蒲不同剂量组紧密连接蛋白的表达较对照组的明显减少，大鼠的紧密连接蛋白claudin-5和occludin表达受抑制，P38MapkmRNA信号通路表达下调。石菖蒲可以下调大鼠的紧密连接相关蛋白claudin-5和occludinP38Mapk信号表达通路mRNA表达水平,降低紧密连接相关蛋白claudin-5和occludin蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。
结论：
1．石菖蒲对视网膜组织结构有一定的影响，本实验所选三组剂量均没有导致病理性损伤，说明在一般剂量下石菖蒲具有安全性。
2．石菖蒲对血视网膜屏障通透性有影响，且随用药剂量增加，通透性增加。
3．石菖蒲通过下调血视网膜屏障P38Mapk信号通路mRNA的表达，抑制紧密连接蛋白occludin、claudin-5的表达，进而导致血视网膜屏障的通透性改变。
方法：实验包括2部分，第1部分：石菖蒲对大鼠血视网膜屏障用药安全性的研究检测。取20只成年健康SD大鼠，随机分为4组，每组5只：对照组(生理盐水1ml/kg)、石菖蒲低剂量组(0.1g/kg)石菖蒲中剂量组(0.3g/kg)，石菖蒲高剂量组(0.6g/kg)，连续灌胃30天。采用苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin-stained,HE)、光学相干层析技术(Optical Coherence tomography, OCT)观察视网膜结构，评价药物安全性。第2部分：取36只成年健康SD大鼠，随机分为4组，每组9只：对照组(生理盐水1ml/kg)、石菖蒲低剂量组(0.1g/kg)石菖蒲中剂量组(0.2g/kg)，石菖蒲高剂量组(0.3g/kg)，连续灌胃7天。采用伊文思蓝(Evan blue，EB)定量测定、Westernblot实验蛋白浓度测定、RT-PCR检测视网膜p38MAPK信号通路mRNA表达水平，以此评估石菖蒲对视网膜血管通透性的影响。
结果：
1.低剂量组与正常对照组对比厚度差异可忽略不计，中剂量组、高剂量组对比正常对照组视网膜厚度稍有增加，但未超出正常范围。均未见有视网膜异常病变。
2.对照组视网膜组织结构正常，石菖蒲不同剂量组视网膜毛细血管内皮细胞厚薄不等，细胞间隙组织疏松，胞质内部吞饮小泡增多，毛细血管管腔不规则，基膜仍然完整，但未见视网膜组织水肿、细胞空泡、胞体增大、核浓缩和炎症细胞浸润等病理性损害。对照组未见EB渗漏，石菖蒲不同剂量组均呈现不同程度的EB渗漏，且随剂量的增加EB渗漏越明显。
3.石菖蒲不同剂量组EB含量显著高于对照组，石菖蒲中高剂量组EB含量显著高于低剂量组，实验组与对照组差异具有统计学意义(P＜0.01)。
4.石菖蒲不同剂量组紧密连接蛋白的表达较对照组的明显减少，大鼠的紧密连接蛋白claudin-5和occludin表达受抑制，P38MapkmRNA信号通路表达下调。石菖蒲可以下调大鼠的紧密连接相关蛋白claudin-5和occludinP38Mapk信号表达通路mRNA表达水平,降低紧密连接相关蛋白claudin-5和occludin蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。
结论：
1．石菖蒲对视网膜组织结构有一定的影响，本实验所选三组剂量均没有导致病理性损伤，说明在一般剂量下石菖蒲具有安全性。
2．石菖蒲对血视网膜屏障通透性有影响，且随用药剂量增加，通透性增加。
3．石菖蒲通过下调血视网膜屏障P38Mapk信号通路mRNA的表达，抑制紧密连接蛋白occludin、claudin-5的表达，进而导致血视网膜屏障的通透性改变。