【摘 要】
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为探索快速生长期马鹿(Cervus elaphus)鹿茸生长点软骨中新发现的低拷贝microRNAPC-3p-2869的生物学功能。本研究利用microRNAPC-3p-2869的预测靶标,参与肽链延伸、蛋白质翻
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为探索快速生长期马鹿(Cervus elaphus)鹿茸生长点软骨中新发现的低拷贝microRNAPC-3p-2869的生物学功能。本研究利用microRNAPC-3p-2869的预测靶标,参与肽链延伸、蛋白质翻译后修饰、细胞骨架调节、细胞周期、生长和死亡调控等,同时在真核细胞中高度保守的GTP结合蛋白eEF1A1(真核翻译延伸因子1A1)进行验证。通过荧光素酶报告系统、定量逆转录PCR以及western blot实验研究microRNA PC-3p-2869对eEF1A1的调控作用,同时采用细胞增殖、迁移和侵袭实验研究microRNA PC-3p-2869对细胞生理功能的影响。结果显示:(1)当microRNA PC-3p-2869 mimics与eEF1A1 3’UTR野生型重组质粒共转染293T细胞系时,相较于其他实验组,本组的荧光素酶的表达量明显下降。(2)当 microRNA PC-3p-2869 mimics 和 NC mimics(negative control mimics,NC)分别转染MG63细胞系时,western blot实验检测microRNA PC-3p-2869 mimics处理组内源eEF1A1蛋白表达量显著下降。(3)当 microRNAPC-3p-2869 mimics 和 NC mimics 分别转染 MG63 细胞系时,定量逆转录PCR结果表示microRNA PC-3p-2869 mimics处理组eEF1A1 mRNA的表达量并未减少。(4)当 microRNAPC-3p-2869 mimics 和 NC mimics、si-eEF1A1 和 si-NC 分别转染MG63和U2OS细胞系时,细胞增殖、迁移和侵袭实验检测microRNA PC-3p-2869 mimics或si-eEF1A1处理组细胞的增殖、迁移和侵袭受到阻滞或抑制。研究表明:MicroRNA PC-3p-2869具有生物学功能;MicroRNAPC-3p-2869可以特异性靶向eEF1A1 3’UTR,通过抑制mRNA翻译的方式负调控内源eEF1A1基因的表达,从而阻滞或抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭;MicroRNA PC-3p-2869负调控eEF1A1基因表达的机制具有进化保守性。
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