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烷基糖苷是一类新型非离子表面活性剂,具有无毒、无刺激和可生物降解等特点,在洗涤剂、食品和化妆品等领域有着广泛的用途和良好的发展前景。目前研究较广泛的是化学法合成烷基糖苷,酶法与之相比具有选择性强、反应条件温和以及副产物少等优点。基于酵母表面展示技术得到的表面展示棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶和泰国红木β-葡萄糖苷酶的催化剂,具有固定化酶的特性及优点,容易于回收与再利用。用于在水-醇双相体系中合成表面活性剂(烷基糖苷),克服了游离酶在分离纯化、再生以及循环利用等方面的困难,并且其制备方法简单、成本较低、可以重复利用,使酶法合成烷基糖苷前景广阔。本研究对棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶和泰国红木β-葡萄糖苷酶各自展示毕赤酵母表面催化合成烷基糖苷的反应体系进行了优化。在以展示毕赤酵母表面棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶为催化剂的反应体系中,分别考察了反应体系中水含量、底物葡萄糖添加量、催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓冲液pH值和温度等几个影响糖苷反应的因素。结果表明:在5mL反应体系中,葡萄糖0.1g(1-己醇),0.3g(1-辛醇和1-癸醇),催化剂(3052U/(g.drycell))0.05g(1-己醇和1-辛醇),0.2g(1-癸醇),pH3.0乙酸-乙酸钠缓冲液0.5mL(1-己醇),0.75mL(1-辛醇),1mL(1-癸醇),为最佳反应条件。放置55℃200r/min恒温振荡器中,反应时间为72h,己基β-D-葡萄糖苷和癸基β-D-葡萄糖苷的最大产率分别为11.69%和3.58%,而辛基β-D-葡萄糖苷的产率则在96h到达最大值6.34%。用毕赤酵母表面泰国红木β-葡萄糖苷酶为催化剂,分别考察了反应体系中水含量、底物葡萄糖添加量、催化剂添加量、乙酸-乙酸钠缓冲液pH值和温度等几个影响糖苷反应的因素。结果表明:在5mL反应体系中,初始水活度为0.75的葡萄糖和催化剂(479U/(g.dry cell))分别0.2g,0.3g,为最佳反应条件。放置50℃200r/min恒温振荡器,反应时间为96h,己基β-D-葡萄糖苷最大产率为28.04%;葡萄糖0.3g(1-辛醇和1-癸醇),0.5g(1-十二醇)。催化剂(479U/(g.dry cell))0.1g(1-辛醇和1-癸醇),0.3g(1-十二醇)。0.5mL(1-辛醇和1-癸醇)pH4.0乙酸-乙酸钠缓冲液,1.5mL(1-十二醇)pH5.0乙酸-乙酸钠缓冲液,为最佳反应条件。放置60℃200r/min恒温振荡器中,反应时间为96h,辛基、癸基和十二基β-D-葡萄糖苷的产率分别达到9.68%,8.23%和1.29%。用该催化剂以pNPG、甲基β-D-葡萄糖苷和丁基β-D-葡萄糖苷为底物转糖苷催化合成烷基糖苷。结果表明该酶具有转糖苷能力。尤其以丁基β-D-葡萄糖苷为糖基供体具有更强转糖苷反应能力合成烷基糖苷,尤其对于转糖苷合成十二基β-D-葡萄糖苷产率到达12.95%,远远高于直接糖苷反应1.29%。