论文部分内容阅读
目的:制备抗人异麦芽糖酶卵黄抗体(I-Ig Y)和抗人蔗糖酶卵黄抗体(S-Ig Y),探讨其对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖的影响。方法:(1)抗人I-Ig Y和S-Ig Y的制备及鉴定:人异麦芽糖酶(ISO)和人蔗糖酶(SUC)作为抗原免疫产蛋鸡,硫酸钠水稀释提取法分离纯化鸡Ig Y,BCA法测定蛋白含量,SDS-PAGE分析Ig Y纯度,间接ELISA法检测Ig Y的效价,Western blot鉴定Ig Y的特异性;PNPG法测Ig Y对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果;ELISA法评价在不同温度、不同p H、胃蛋白酶、胰蛋白酶的条件下Ig Y的稳定性;灌胃BALB/c小鼠检测Ig Y的毒性。(2)建立T2DM大鼠模型:高糖高脂饲料喂养的SD大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(STZ),获得T2DM大鼠模型。(3)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对T2DM大鼠空腹血糖影响:正常组、T2DM模型对照组、抗人I-Ig Y干预组、抗人S-Ig Y干预组和阿卡波糖干预组连续灌胃4周,分别在第2、3、4周测定其空腹血糖(FBG)水平。(4)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对T2DM大鼠糖耐量的影响:每组大鼠禁食不禁水12小时后,正常组灌胃葡萄糖溶液,模型对照组灌胃葡萄糖溶液和0.01mol/L PBS,抗人I-Ig Y组灌胃葡萄糖溶液和抗人I-Ig Y,抗人S-Ig Y组灌胃葡萄糖溶液和抗人S-Ig Y,阿卡波糖组灌胃葡萄糖溶液和阿卡波糖。分别于0、1、2小时后尾静脉取血检测血糖水平。结果:(1)硫酸钠水稀释提取法获得的Ig Y含量高且蛋白杂带较少,抗人I-Ig Y和S-Ig Y效价达1:12800,Western blot检测结果表明两种Ig Y均能与相应的抗原特异性结合。(2)抗人I-Ig Y和S-Ig Y对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度值(IC50)分别为0.616mg/m L和0.537mg/m L。(3)抗人S-Ig Y相对于抗人I-Ig Y,其拥有较好的热稳定性、较好的酸碱稳定性和相对较好的胃蛋白酶抵抗力,但对胰蛋白酶抵抗力较差,两种Ig Y对BALB/c小鼠均没有毒性。(4)T2DM大鼠建模成功;(5)与对照组相比,抗人S-Ig Y能降低T2DM大鼠的FBG含量(P<0.05),抗人I-Ig Y和抗人S-Ig Y均能改善T2DM大鼠的糖耐量(P<0.05)。结论:经ISO和SUC作为抗原免疫产蛋鸡收获的抗人I-Ig Y和S-Ig Y均能改善T2DM大鼠的糖耐量,抗人S-Ig Y能降低T2DM的FBG水平。