论文部分内容阅读
目的:将肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因导入人胃肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL),构建转基因TIL,进行体外抗肿瘤活性研究,探讨转基因TIL对胃癌治疗的价值。方法:从15例胃癌手术患者的转移淋巴结(术后病理证实)中分离TIL及胃癌细胞并在体外培养扩增,应用脂质体将TNF-α基因导入胃肿瘤浸润性淋巴细胞,构建抗肿瘤效应细胞~转基因TIL。用血球计数板计数,绘制转基因TIL及TIL细胞生长曲线,用蛋白印迹法检测目的基因表达的产物,用MTT法检测转基因TIL体外抗肿瘤活性。结果:在转导后15例患者的TIL中:2例TIL筛选时死亡,转导失败;1例TIL筛选过程中污染死亡;剩余12例蛋白质印迹结果均出现TNF蛋白的特异性条带,且条带灰度较TIL的条带灰度大。MTT结果示:12例蛋白印迹证实转导成功的转基因TIL中,8例转基因TIL与TIL在相同的效靶比和作用时间下对胃癌细胞的体外杀伤率无统计学差异(p>0.05),4例有统计学差异(p<0.01)。12例均有作用时间和效靶比依赖性。同一作用时间下,转基因TIL和TIL对胃癌细胞的体外杀伤率随着效靶比的增加而增加,效靶比达10:1以上时,杀伤率明显增加,之后小幅度增加,效靶比为40:1时,效应细胞的杀伤活性可达80%以上;同一效靶比时,杀伤率随作用时间的延长而增加,但增加的幅度相似,无明显峰值。作用时间12小时与24小时、48小时的杀伤率无统计学差异(p>0.05),与6小时有统计学差异(p<0.05);效靶比10:1的杀伤率与20:1、40:1无统计学差异(p>0.05),与5:1有统计学差异(p<0.05)。在相同的培养条件下,转基因TIL与TIL的增殖活性及细胞增殖曲线相似。