化合物活性筛选是药物创新研究的起点和具有决定意义的步骤，是源头创新和持续创新的关键，离开筛选就无从发现具有某种特定生物活性的新型化学物质，新药的研究开发就将成为无源之水。但是，这种基本技术能力恰恰是我国创新药物研制中最为突出的薄弱环节，成为制约医药工业转型的"瓶颈"之一。传统的动物筛选模式劳动强度大、效率低，近年来，随着分子生物学、分子药理学和自动化技术的发展，高通量药物筛选(High throughput screening, HTS)成为药物早期发现的重要手段。它是利用药靶的分子或细胞水平的生物学机制，以微孔板为基础进行大量筛选，找到能选择性作用于药靶的活性化合物，具有微量、快速、灵敏、准确等优点。 人胰高血糖Glucagon Receptor (GCG-R)能够活化腺苷酸环化酶，通过Gs型蛋白偶联GTP使细胞内信号完成表达。胰高血糖素具有活化磷脂酶C，并通过肌醇磷酸盐通道导致细胞内Ca2+流失，升高血糖的生理学功能， GCG-R偶联Ca2+流失，经Gs通道激活腺苷酸环化酶激活了其信号转道通路。GCG-R的拮抗剂可能是治疗2型糖尿病的有效药物。为了进一步了解GCG-R的生理学功能和开展抗2型糖尿病新药研究，作者建立了GCG-R拮抗剂的高通量筛选模型，并以天然产物为资源，筛选了GCG-R的拮抗剂。 建立了人GCG-R基因质粒(GCG-R/ pcDNA3.1)和一个能同时响应Gs、Gi和Gq受体的报告基因质粒(MRE/CRE/SRE/LUC)，并将GCG-R质粒和报告基因质粒共转染到HEK293细胞、SH细胞、CHO细胞、Hela细胞等，通过G418筛选，建立了稳定的GCG-R受体拮抗剂筛选细胞株，并选出最优的CHO细胞株作为筛选用细胞株。当化合物与膜表面的GCG-R结合后，抑制GCG-R对应的信号级联反应，改变胞内第二信使的表达水平，响应元件响应这种变化，促进报告基因的表达。通过检测细胞质中报告基因的表达量，间接评估化合物的生物活性 。 为了有效排除筛选过程中的假阳性和假阴性，同时建立了只含报告基因质粒的阴性细胞株。 利用 cAMP响应元件CRE的激活剂Forskolin和受体内源激动剂Glucagon探索和优化了荧光素酶表达时间、每孔细胞数目、溶剂DMSO终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选实验条件，建立了可靠的筛选方法。实验结果表明，GCG-R细胞株用于高通量筛选的条件为：细胞数目4′104个/孔，激动剂孵育时间为6h，每孔DMSO终浓度小于1％，荧光素酶底物终浓度为12.5％(V％),其系统Z’因子为0.74，适用于GCG-R拮抗剂的高通量筛选。 利用建立的筛选模型对500种天然产物水醇提物10500个样品进行了筛选，发现43种天然产物水提物样品对GCG-R活性有较好的抑制作用。 综上所述，本文建立的筛选模型能够用于GCG-R拮抗剂的高通量筛选。