人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是重要的性传播因子，可引起人皮肤粘膜的增生性疾病及恶性肿瘤。根据HPV与良恶性病变的关系分为低危组和高危组。HPV16是高危组最重要的基因型，与宫颈癌等泌尿生殖系恶性肿瘤的发生密切相关，除此之外还与口腔癌、肺癌、食管癌的发生具有一定的关系。我组多年攻关研究及国外报道均表明：HPV16E6及E7为病毒的主要转化基因，E6及E7的表达为癌细胞恶性表型维持所必须。流行病调查资料显示：人群感染HPV16后，可产生抗HPV16E6及E7特异免疫。因而，研制防治HPV16相关疾病的疫苗，E6和E7是理想的靶抗原。 由于E6及E7为病毒转化基因，利用E6及E7基因直接作为疫苗具有潜在的致癌性，因此去除E6及E7的转化活性，保留其抗原性是利用E6及E7研制疫苗的前提。文献报道表明E7第24位氨基酸的突变可废除E7的转化活性。为了涵盖较多的抗原表位，本研究拟利用中国宫颈癌标本中E6及E7基因作为疫苗研究的靶基因。定点突变E7的第24位氨基酸，敲除E7的转化活性，然后对E6的终止密码区进行突变修饰，构建E6E7融合基因fmE6E7(fused and mutated E6E7gene，fmE6E7)，在证实fmE6E7的转化活性敲除之后，用于DNA疫苗的构建及研究。 根据T淋巴细胞活化的双信号学说和MHC(major histocomplex)I类分子呈递抗原的规律，为了有效地活化T细胞，本研究构建淋巴细胞活化所必需的共刺激分子B7-1的真核表达质粒pcDNA3.1-B7-1，采用裸DNA肌肉接种的免疫方式，使E6E7在机体组织细胞内翻译成蛋白进入MHCI类分子抗原呈递途径，同时辅以共激活分子B7-1基因共同免疫，以期有效地活化机体的免疫反应，特别是CTL(cytotoxic T lymphocyte，CTL)活性。获得以下结果： 1．首先对宫颈癌标本中HPV的感染型别进行检测，14例宫颈癌活检标本中，