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发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是由发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)引起的一种新发病毒性传染病,夏秋季为发病高峰,患者多为中老年人,主要通过蜱虫叮咬传播,近年来报道了多起聚集性疫情,提示该病毒在特定条件下具备人传人的能力。SFTS患者主要表现为发热、恶心、乏力、呕吐等胃肠消化道症状,实验室检查常见血小板减少、白细胞减少、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶水平升高,严重患者会表现出多器官功能衰竭,甚至导致死亡。以往研究观察到SFTSV可能导致水貂流产,但对于SFTSV能否通过胎盘屏障导致胎儿流产尚不明确。本研究从患者血清中成功分离出SFTSV,选用C57BL/6孕鼠作为实验对象,在孕鼠的不同孕期阶段通过肌肉注射不同滴度的SFTSV,在孕晚期处死部分孕鼠,统计胎鼠发育情况并收集各类脏器,剩余的孕鼠正常分娩。通过检测胎盘和胎鼠各脏器中SFTSV核酸和抗原,探究SFTSV是否能通过胎盘屏障;通过统计胎鼠的发育情况探究SFTSV能否导致胎鼠损伤。本研究有利于人们全面了解SFTSV的传播方式和危害,为SFTS精准防控提供依据。目的:1.从病人血清中分离SFTSV,探究SFTSV能否通过胎盘屏障垂直传播。2.探究SFTSV能否通过胎盘屏障导致胎鼠损伤,为SFTSV的精准预防提供依据。方法:1.利用核酸提取和巢式PCR技术筛选出SFTSV核酸阳性患者标本,将其接种单层Vero细胞,盲传3代分离SFTSV。2.使用 PCR、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)和透射电镜技术确认成功分离到SFTSV。使用Vero细胞收获分离的SFTSV,并用50%终点法测定病毒滴度。3.选用C57BL/6孕鼠为实验对象,在孕早期和孕晚期通过肌肉注射途径感染SFTSV。在孕17天和分娩后1天处死母鼠,收集母鼠脏器、胎盘、胎鼠等样本。4.使用ELISA 和实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测孕鼠血清,确认孕鼠是否成功感染SFTSV;观察记录胎鼠发育情况并收集完整胎鼠的体长数据,通过统计分析探究SFTSV对胎鼠发育的影响。5.利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法探究SFTSV在孕鼠脾脏、胎盘、胎鼠分布特征;利用IFA方法探究胎鼠体内是否存在感染性SFTSV;通过qRT-PCR定量检测在孕鼠脾脏、血清、胎盘和胎鼠内脏中SFTSV的含量。结果:1.6份患者血清中有4份检测为SFTSV核酸阳性,将4份血清分别感染单层Vero细胞,盲传3代后仅1份细胞上清中检测到SFTSV RNA。2.IFA和透射电镜观察确认成功分离到了一株新SFTSV毒株;PCR扩增上述SFTSV序列,经序列拼接,成功获取该毒株的全基因组序列;50%终点法测得SFTSV毒株的 TCID50 为 106.25/100μL。3.ELISA和qRT-PCR结果显示实验组孕鼠均成功感染了 SFTSV;部分实验组出现死胎、胎鼠生长受限、胎盘异常等现象,孕鼠在孕早期(孕4天)感染低滴度SFTSV(103TCID50/100μL)后胎鼠表现为生长受限,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.IHC结果显示SFTSV主要分布在脾脏的红髓,胎盘的迷宫区和胎鼠的肝、胸腺、后脑、心脏等器官;IFA结果表明实验组胎鼠体内存在感染性SFTSV,进一步提示了 SFTSV能通过胎盘屏障传给胎鼠;qRT-PCR结果显示母鼠脾脏中病毒载量较高,母鼠血清、胎盘和胎鼠内脏中病毒载量较低。结论:1.成功分离得到SFTSV毒株,首次提示了在孕鼠中SFTSV可以通过胎盘屏障垂直传播给子代。2.证实了 SFTSV可以通过胎盘屏障导致胎鼠损伤,造成吸收胎、胎鼠生长受限等不良妊娠结局。