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本文对葛根素抑制膜透析液糖基化终产物形成及损害进行了体外研究。本研究分为两个部分;
第一部分:葛根素对体外腹膜透析液中糖基化终产物形成的抑制作用。
目的:观察葛根素能否在体外减少商业腹透液中晚期糖基化终产物的产生。
方法:将20克胎牛血清白蛋白充分溶解于2.5%腹膜透析液1000毫升,并加入不同浓度的葛根素,根据葛根素终浓度分5组观察(A组:葛根素终浓度为0g/1,B组:葛根素终浓度为0.01g/1,C组:葛根素终浓度为0.05g/1,D组:葛根素终浓度为0.1g/1,E组:葛根素终浓度为0.2g/1)。过滤除菌后37度温箱保存,分别于第一天(d1)、7天(d7)、30天(ml)、60天(In2)、以及90天(m3)时取样本1m1,进行糖基化终产物测定。
结果: 腹膜透析液中添加胎牛血清白蛋白后,随着时间的延长,透析液中糖基化终产物的浓度逐渐升高。加入不同浓度葛根素的试验组,其糖基化终产物的浓度均较同期未加入葛根素的试验组明显降低,并且随着葛根素浓度增加,糖基化终产物的浓度越低。
结论:葛根素对体外腹膜透析液中糖基化终产物形成有明显的抑制作用,且葛根素的这种抑制作用呈现剂量依赖性。
第二部分:葛根素抑制腹膜透析液中糖基化终产物形成的作用及对体外培养腹膜间皮细胞增殖活性及细胞因子分泌的影响。
目的:观察葛根素在抑制糖基化终产物形成的同时能否起到对腹膜间皮细胞的保护作用,并减少致纤维化细胞因子分泌。
方法:取非尿毒症、非糖尿病择期手术病人的网膜作为间皮细胞来源,按文献方法培养人腹膜间皮细胞,制成细胞悬液后分别加入完全培养基各0.5mL和按第一部分实验方法将不同浓度葛根素和胎牛血清白蛋白以及腹膜透析液混合孵育三个月的A、B、C、D、E分装溶液,分别将其建立为A、B、C、D、E五组;另将制成细胞悬液加入RPMI1640培养液和完全培养基各0.5mL作为空白对照组;将制成细胞悬液加入2.5%腹透液和完全培养基各0.5mL作为实验对照(PDS组)。上述七组同步干预24小时后分别测定各组间皮细胞的细胞增殖活力(四甲基偶氮唑盐MTT法),并检测各组上清液中的TGF-β1、VEGF水平。
结果:PDS组腹膜间皮细胞经PDS干预后,其MTT还原能力显著低于空白对照组(P<0.O1);在不含葛根素的A组,腹膜间皮细胞的MTT还原能力显著低于空白对照组和PDS组(P<0.01);加入不同浓度葛根素的B、C、D、E组其腹膜间皮细胞的MTT还原能力逐渐上升,其中C、D、E组MTT还原能力与A组比较存在显著差异,P<0.01。E组MTT还原能力显著高于PDS组,P<0.05。空白对照组TGF-β1、VEGF浓度显著低于其他各组,P<0.01。A组显著高于PDS组,P<0.01。A、B、C、D、E组TGF-β1、VEGF含量随着葛根素含量的增加而减少,其中,C、D、E组显著低于A组,P<0.05;D、E组显著低于B组,P<0.05;E组显著低于C组,P<0.01。E组TGF-β1、VEGF含量显著低于于PDS组,P<0.01。
结论:糖基化终产物可以加重腹膜透析液对腹膜间皮细胞的损伤,进一步促进致纤维化细胞因子分泌。葛根素在抑制糖基化终未产物形成的同时可以起到对腹膜间皮细胞的保护作用,并减少致纤维化细胞因子分泌。