激光散斑成像结合光化学脑缺血模型及在相关药物筛查中的应用

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目的:激光散斑成像是近年兴起的一种活体成像技术,用于观察活体组织内的血流,而如何运用于脑血管病的研究还存在医学转化的实际困难。本论文采用激光散斑成像技术观察小鼠脑血流量和脑血流改变情况下侧支循环情况,结合小鼠的光化学脑缺血模型和标准化方法用于动态、连续监测缺血灶模型的信号改变规律。进一步分析血流信号改变与脑组织病理变化相互关系,探索光化学模型的神经血管的变化规律。以验证光化学脑缺血模型激光散斑成像成为一种高效的药物筛查方法的可能性。方法:利用激光散斑成像系统观察C57/BL6小鼠的脑皮层血流图,通过结扎单侧颈动脉的方法观察小鼠侧支循环形成情况。通过不同激光剂量进行小鼠脑光化学造模,探索不同剂量激光造模的效果与特点。分析脑皮层缺血区域血流信号的改变与小鼠脑梗塞体积、小血管数量的关系。免疫荧光检测小血管的变化规律及以小血管为中心的神经细胞、胶质细胞的变化规律。采用激光散斑成像技术验证尤瑞克林、米诺环素、地塞米松的对光化学脑缺血模型的作用。结果:激光散斑成像实现C57小鼠动态的脑皮层血流检查,C57小鼠进行光化学脑缺血造模后可以进行多次重复性检查。不同剂量激光造模造成的光化学缺血灶病理改变具有不同特点。光化学缺血区域标准化的SrCBF (Standardized Regional Cerebral Blood Flow)与缺血组织体积呈负相关关系,相关系数R2为0.9001;标准化的SrCBF变化趋势与缺血区域小血管的单位面积百分比变化趋势类似。病理结果显示化学模型的缺血区域在1d内仍有Neun阳性细胞;28d发现在缺血边缘发现极少量的Neun阳性及Brdu阳性的细胞。通过GFAP染色,可以发现在光化学缺血性脑缺血模型的缺血灶的边缘区可以发现星形胶质细胞的活化,5d时星形细胞活化达到顶峰,活化的星形细胞与小血管关系密切。在光化学模型的药物筛查实验中,手术后3d收集比较小鼠皮层的兴趣区的SrCBF,米诺环素组的局部血流量和脑缺血组织体积与对照组比较具有统计学差异。结论:激光散斑成像系统能够实时动态的显示脑血流的变化,这为小鼠脑皮层小血管功能和脑缺血的侧支循环相关研究提供了良好的研究工具。不同剂量的光化学造模可以制作出不同程度的缺血梗塞灶,适合不同类型实验的研究需要。通过激光散斑成像的标准化的SrCBF可以作为血流量的指标,可用于评价不同小鼠的血流恢复程度,一定程度上反映小鼠的光化学缺血灶的缺血组织体积大小,提示局部小血管的数量。光化学脑缺血模型中,小血管与神经细胞、星形胶质细胞具有紧密关系。激光散斑成像系统光化学脑缺血模型检验脑缺血后的药物治疗效果具有一定可靠性和高效性,米诺环素等抗炎、血管保护药物可能有益于相关疾病的治疗。
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