论文部分内容阅读
目的在许多癌症中,肿瘤抑制基因RASSF2A由于其启动子的甲基化而失活,本实验的研究目的是对于RASSF2A基因在乳腺癌中表达及异常甲基化的探究。方法(1)利用实时荧光定量PCR技术检测2株人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和1株正常乳腺上皮细胞系HBL-100中RASSF2A基因m RNA表达水平,以及这2株人乳腺癌细胞系在不同浓度去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-Cd R)连续处理5天前后RASSF2A基因m RNA表达水平变化;同时运用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)技术对这2株人乳腺癌细胞和1株正常乳腺上皮细胞RASSF2A基因甲基化状态进行对比检测分析。(2)收取42例乳腺癌及其癌旁正常组织标本,利用实时荧光定量PCR和MSP技术分别检测RASSF2A表达水平和其启动子区域甲基化状态,分析RASSF2A甲基化与乳腺癌主要临床病理特征参数之间的关系。结果人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中RASSF2A m RNA表达水平降低,其中MCF-7的表达水平更低,与正常乳腺上皮细胞系中该基因表达水平相比有统计学差异(P1=0.000;P2=0.000);MSP结果证实这2株癌细胞系的RASSF2A启动子区域均存在完全甲基化,而正常乳腺上皮细胞未出现甲基化改变;但经5-Aza-Cd R去甲基化处理3天后,乳腺癌细胞系RASSF2A m RNA表达水平又开始升高,并在一定程度上存在时间和剂量的依赖性,尤以MCF-7为明显。这说明在MCF-7和MDA-MB-231中,RASSF2A基因表达异常是甲基化修饰致基因表达沉默的结果。针对临床42例乳腺癌组织标本的验证研究显示,RASSF2A m RNA在癌组织的表达水平较癌旁正常组织明显降低(P=0.016),其中17(17/42)例低表达者乳腺癌组织表现为RASSF2A启动子甲基化,而相匹配的42例癌旁正常乳腺组织中均未检测到RASSF2A启动子甲基化(P=0.000)。乳腺癌中RASSF2A启动子甲基化与病人的年龄、肿瘤大小、肿瘤分级、TNM分期、ER、PR和Her2状态、以及腋窝淋巴结转移等临床病理指标的相关性均无显著相关性(P>0.05)。结论在人乳腺癌细胞系和乳腺癌癌组织中RASSF2A m RNA表达水平降低,其原因经体外细胞学研究证实与该基因启动子区域甲基化密切相关;进一步临床组织标本的研究也表明癌组织中存在RASSF2A启动子甲基化而配对的癌旁正常乳腺组织无异常甲基化。RASSF2A启动子甲基化可能抑制了该基因转录,使其失去抑癌基因的功效,从而在乳腺癌的发生发展中起到一定的促进作用。