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目的前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一。现代研究表明,花粉在前列腺相关疾病的治疗中具有一定的作用。磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路与前列腺癌的发生和发展密切相关。本研究从枸杞花粉中分离提取并纯化得到较均一的多糖组分,并用细胞和动物实验观察其对人前列腺癌DU145细胞的凋亡及其对PI3K/AKT信号通路的影响;探讨枸杞花粉多糖的抗肿瘤活性及其可能的机制,为枸杞花粉多糖的生物学价值和前列腺癌的预防提供新的理论依据。方法通过水提醇沉法从枸杞花粉中提取粗多糖(Pollen Polysaccharides from Chinese Wolfberry,WPPs),经DEAE-纤维素柱和Sephadex G-100柱纯化后得到组分CF1。通过高效凝胶过滤色谱法鉴定CF1组分的均一性,并测定其分子质量;使用高效液相色谱法检测CF1组分的单糖组成。细胞实验采用不同浓度(0、125、250、500μg/mL)枸杞花粉多糖处理DU145细胞24 h,通过细胞增殖检测实验(MTT法)检测DU145细胞的增殖情况;采用原位末端标记法(Tunel)、流式细胞仪检测细胞凋亡;运用蛋白印迹法(Western blot)检测经枸杞花粉多糖处理后细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。动物实验通过建立前列腺癌荷瘤小鼠模型,用枸杞花粉多糖进行灌胃给药,测量肿瘤大小并计算抑瘤率,同时用Tunel法检测肿瘤组织中的凋亡情况以及用免疫组化法检测肿瘤组织中PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况。结果(1)枸杞花粉多糖的CF1组分为较均一的多糖,分子量大小为1540.10±48.78kDa;单糖组成为甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、木糖、半乳糖、阿拉伯糖和盐藻糖;摩尔比分别为0.68:0.59:0.27:0.24:0.22:0.67:0.08。(2)将枸杞花粉多糖组分CF1处理DU145细胞24 h后,使用MTT试剂盒检测该多糖对DU145细胞的增殖情况,计算出IC50为374.11μg/mL。(3)通过Tunel和Annexin V/PI双标记结合流式细胞分别定量检测细胞凋亡,发现枸杞花粉多糖组分CF1处理DU145细胞24 h后,细胞凋亡发生率较对照组显著增加(P<0.05);同时用Tunel法检测裸鼠肿瘤组织中的凋亡情况发现细胞凋亡水平较模型组升高(P<0.05)。(4)裸鼠移植瘤中,枸杞花粉多糖组肿瘤的体积及瘤重较模型组明显下降(P<0.05),低、中、高剂量组抑瘤率分别为40.16%、57.98%、62.31%,但抑瘤率低于环磷酰胺组66.45%。(5)分别用Western blot和免疫组化法检测DU145细胞和裸鼠肿瘤组织中PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达情况,结果发现经枸杞花粉多糖组分CF1处理DU145细胞和肿瘤组织中PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而Caspase-3蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),并且细胞中Bax、Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2/Bax的比值降低。结论枸杞花粉多糖能通过诱导细胞凋亡来抑制前列腺癌DU145细胞增殖,并能抑制前列腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤的生长,降低肿瘤的体积及重量,其作用机制与抑制细胞PI3K/AKT信号通路的激活,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,上调凋亡蛋白Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达水平有关。