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纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种有机化合物，占植物干重的1/3~1/2，是世界总量最大的可再生资源，合理地开发与利用纤维素资源对于缓解能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。利用微生物及其产生的纤维素酶来分解纤维素是一种有效且无污染的方法。纤维素酶是降解纤维素的高活性生物催化剂，广泛用于饲料、环保、食品、酿酒、纺织、造纸等领域。但天然的微生物生产纤维素酶存在酶产量低、活性低、受到葡萄糖等产物的反馈抑制等许多问题，这些问题极大地影响了纤维素酶的工业化生产。应用基因工程技术来获得高活力、高产量的纤维素酶资源越来越受到人们的重视。纤维素外切酶是纤维素水解酶系中唯一可以作用于结晶纤维素的酶组分，对纤维素的降解有着重要的作用。本实验从纤维素酶高产菌康氏木霉(Trichoderma koningii)的染色体DNA中扩增得到外切葡聚糖酶CBHⅠ基因，构建重组表达质粒pGAPZαA-CBHⅠ并通过高压电击手段转入到毕赤酵母（Pichia pastoris）X-33中，实现了CBHⅠ基因在毕赤酵母中的表达。主要内容包括以下：采用PCR技术扩增得到CBHⅠ基因，与克隆载体PMD19-T连接后转入大肠杆菌DH5α，测序及序列比对结果显示该DNA序列全长1626bp，与Genbank已公布的Trichoderma viride（FJ871063.1）的同源性达到99.63%，推测其编码的蛋白质含497个氨基酸，分子量约为52.29kDa，蛋白质等电点pI=4.28。将CBHⅠ基因与表达载体pGAPZαA连接后，通过过渡宿主大肠杆菌再转化到毕赤酵母X-33中，将经过鉴定的重组酵母茵株接种于YPD液体培养基，定时取样进行纤维素酶活性测定与SDS-PAGE蛋白电泳检测，并对其产酶性质进行分析。结果显示：重组酵母菌发酵培养液羧甲基纤维素酶活力最高达到1.1798U/mL，微晶纤维素酶活力最高达到0.1276U/mL，SDS-PAGE蛋白电泳显示表达蛋白的分子量约为53kDa。结果表明康氏木霉纤维素酶CBHⅠ基因在毕赤酵母中成功表达。该重组酶最适反应温度为45~50℃，最适反应pH为4.5~5.0。