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本研究旨在研究快速检测苯二氮卓类(BZD)的间接酶联免疫(ELISA)方法和竞争性胶体金免疫层析方法。实验选择了硝西泮(NZP)、氯硝西泮(CZP)和地西泮(DZP)作为研究对象,首先对三种物质分别进行衍生化,合成相应的半抗原;再将半抗原分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)交联,制备成免疫抗原和包被抗原;将得到的免疫原免疫新西兰白兔,每种免疫原免疫2只兔子,5次免疫后测定每只兔子抗血清的效价,并选择效价高的血清供后面实验用。设计了检测NZP的间接竞争ELISA方法,并优化稀释缓冲液、pH、竞争时间等实验条件确定最终的ELISA检测系统。该间接竞争ELISA方法的IC50为1.531 ng/mL,LOD为0.081 ng/mL,检测范围在0.17~13.8 ng/mL,NZP尿样中的回收率在62.8%~85.6%之间,相对标准偏差低于5.67%,抗NZP的抗体对分子结构相似的氯硝西泮,地西泮和2种代谢物7-氨基硝西泮、7-氨基氯硝西泮都具有交叉反应,但对其他类镇静类药物如盐酸异丙嗪等则具有较好的特异性,交叉反应率均≤0.1%。本研究还设计了检测NZP竞争性胶体金免疫层析试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备了18.6 nm左右的胶体金溶液。在标记NZP多克隆抗体时,最佳pH值为9,最适标记抗体浓度为20μg/mL。选用Millipore公司的M135硝酸纤维膜,上海金标有限公司的VL78玻璃纤维膜为金标垫,SB06玻璃纤维膜为样品垫,吸水纸,PVC底板组装成试纸条。其中每金标垫上喷涂60μL金标抗体,检测线和质控线分别用0.5 mg/mL的NZP包被抗原和0.2 mg/mL的羊抗兔IgG二抗。用试纸条检测NZP标准溶液,检测限为150 ng/mL。本研究所建立的检测NZP的间接ELISA方法的各项参数都达到了国外试剂盒的指标和要求,可用于实际检测;本研究的胶体金免疫层析试纸条实验为NZP胶体金试纸条的深入研究提供了重要的实验依据,也对食品中其它小分子兽药残留检测试纸条的研制提供了基础。