制何首乌基于Wnt/β-catenin信号通路改善糖尿病脑病认知功能障碍机制的研究

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目的:通过检测制何首乌对糖尿病大鼠灌胃后海马组织的MLCK、NMDAR亚基NR2B和Wnt/β-catenin通路相关分子表达变化,以及学习记忆功能和海马神经元超微结构的变化,来探讨制何首乌改善糖尿病脑病可能的机制。研究方法:1.水迷宫实验选取认知功能在同一水平的SD大鼠,将其随机分为对照组(n=12),糖尿病组(n=12),制何首乌低剂量组(n=12),制何首乌高剂量组(n=12),胰岛素组(n=12)。后四组腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型。2.模型成立后,胰岛素组以每天胰岛素8U/kg两次进行皮下注射,低剂量组以制何首乌1g/kg进行灌胃,高剂量组以2g/kg进行灌胃,总共8周。3.灌胃和腹腔注射期间,监测各组大鼠空腹血糖;灌胃结束后,水迷宫监测各组大鼠认知功能;电镜观察各组海马神经元超微结构的改变;HE染色观察各组海马组织的形态;Western blot检测各组海马组织中MLCK、NR2B、P-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin、p-β-catenin等蛋白的表达,酶联免疫吸附法检测各组大鼠海马组织中Wnt3a蛋白的表达。结果1.与对照组比较,糖尿病组空腹血糖明显上升(P<0.01);与糖尿病组相比较,胰岛素组和何首乌高剂量组空腹血糖值明显下降(P<0.01),且效果比低剂量组明显。2.糖尿病模型组大鼠相对于对照组穿越次数明显减少,逃避潜伏期明显延长(P<0.01);相对于糖尿病组,制何首乌高剂量组和胰岛素组穿越次数有所增加,逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),低剂量组与糖尿病组比较无明显差异(P>0.05)。3.与对照组比较,糖尿病组MLCK、NR2B表达明显增高(P<0.05);与糖尿病组比较,制何首乌高剂量组与胰岛素组MLCK、NR2B表达有所降低(P<0.05),低剂量组与糖尿病组并无明显差异性(P>0.05);相对于对照组,糖尿病组β-catenin、p-GSK-3β表达显著降低,p-β-catenin表达明显升高(P<0.05);相对于糖尿病组,制何首乌高剂量组和胰岛素组β-catenin、p-GSK-3β表达水平升高,p-β-catenin表达有所降低(P<0.05),低剂量组与糖尿病组差异性不大(P>0.05),五组中GSK-3β表达没有明显差异(P>0.05)。4.电镜结果显示,糖尿病组神经元细胞中线粒体肿大呈空泡化,细胞核核膜不完整,神经元数量明显减少;与糖尿病组比较,制何首乌高剂量和胰岛素组神经元细胞中线粒体形态良好,核膜完整,神经元明显增多,且高剂量组较低剂量组显著。5.HE染色结果显示,糖尿病组海马组织细胞结构紊乱,细胞和细胞间质水肿,细胞结构并不完整;制何首乌高剂量组细胞水肿消失,结构清晰,排列规则,且高剂量组比低剂量组明显;胰岛素组海马神经元细胞排列整齐,形态规则,和对照组并无明显差异。6.对于对照组来说,糖尿病组大鼠海马组织中wnt3a的表达明显降低(P<0.05);而对于糖尿病组来说,制何首乌高剂量组和胰岛素组海马组织中wnt3a的表达有所升高(P<0.05),低剂量组和糖尿病组相比wnt3a蛋白表达差异性并不明显。结论:1.制何首乌灌胃后能够改善糖尿病大鼠的海马神经元结构,提高学习记忆能力。2.制何首乌灌胃后能够下调糖尿病大鼠海马组织MLCK、NR2B的表达,同时还可以上调Wnt/β-catenin通路的表达,进而改善糖尿病认知功能障碍。
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