胚胎染色体异常是最常见的自然流产原因，约有50％以上的流产与胚胎的染色体异常相关，绒毛细胞培养核型分析是目前检测染色体的重要方法。但是绒毛细胞培养核型分析需要新鲜无菌标本，而培养失败、母细胞污染等种种缺陷使得其难以得到满意的结果，也使部分染色体异常胚胎导致的复发性流产被诊断为原因不明的复发性流产。所以寻找更理想的方法来了解自然流产绒毛组织的染色体情况是复发性流产诊断和治疗的当务之急。 目前检测绒毛组织染色体的分子生物学技术主要包括：荧光定量PCR(QF-PCR)；以FISH、CGH为代表的分子杂交技术；还有MLPA等多种技术结合的方法。本研究探索新兴的自然流产绒毛组织遗传学分析的方法策略，以更好地满足临床诊断的需要。 论文包括两部分： 第一部分探索用于自然流产绒毛组织遗传分析的分子生物方法策略 【目的】 对比细胞培养核型分析与CGH、MLPA、FISH技术应用于自然流产组织染色体检测的效率及准确性，探索适合绒毛细胞遗传学分析的分子生物方法策略。 【方法】 1.收集17例自然流产绒毛，12例IVF／ICSI治疗后自然流产绒毛，6例正常对照。 2.每例样本进行细胞培养染色体核型分析。 3.每例样本原代组织提取DNA进行CGH分析。 4.每例样本原代组织提取DNA进行MLPA亚端粒探针法检测。 5.由于CGH和MLPA无法识别染色体倍增，所以将两者检测结果显示为正常的样本进行X、Y、18、16探针的原代细胞间期核FISH检测，以辨别倍体；同时使用相应的探针对CGH或MLPA分析发现的异常染色体进行原代细胞间期核FISH验证。 【结果】 1.细胞培养核型分析成功率为91.4％(32／35)，出报告时间为12±3.17天；CGH检测成功率为97.1％(34／35)，出报告时间为5天；MLPA检测成功率100％(35／35)，出报告时间24d小时；FISH检测成功率100％(35／35)，出报告时间4-16小时。 2.几种检测方法结果的比较 1)CGH与MLPA的检测结果符合率100％。CGH、MLPA对绒毛组织原代细胞分析的结果与细胞培养核型分析的结果进行对比：正常结果符合率均为93.75％(15／16，例25核型分析为69，XXX，而CGH、MLPA无法识别)；异常结果符合率分别为66.67％(10／15)、68.75％(11／16)，差异无统计学意义(P=1)。 2)细胞培养核型分析失败的3例样本获得CGH、MLPA、FISH检测结果，有2例未发现非整倍体异常，1例(例32)为XY／X嵌合(78％／22％)；CGH分析失败的1例(例21)样本细胞培养核型分析结果为47，XY,+22，MLPA结合FISH检测的结果为22号染色体三体嵌合体(88％)。 3)CGH、MLPA结合FISH对绒毛组织原代细胞检测的结果再与绒毛细胞培养核型分析的结果对比：正常结果符合率均为100％(16／16)；异常结果符合率分别为73.33％(11／15)、75％(12／16)，差异无统计学意义(P=1)。异常结果中不一致的4例：例3细胞培养核型分析为染色体平衡易位46，XXt(2；9)(q13；q32)，CGH／MLPA结合FISH检测无法识别；例2细胞培养核型分析为47，XX+3，CGH／MLPA结合FISH检测发现为3号染色体三体/二体嵌合(45％／55％)；例14细胞培养核型分析为超四倍体94，XXYY，+3，+3，CGH／MLPA结合FISH检测发现为XXYY／XY／XX嵌合(76％／22％／2％)；例16细胞培养核型分析为46,XX,34％／48,XY+7，+8,66％，CGH／MLPA结合FISH检测发现7、8号染色体双重三体/7号染色体三体嵌合(97％／2％／1％)。 【结论】 1.CGH、MLPA无需新鲜无菌标本，能对自然流产绒毛组织原代细胞分析，且比细胞培养核型分析的检测成功率高、出报告时间短。 2.CGH、MLPA分析结合FISH结果能对培养失败的绒毛样本进行准确分析。 3.细胞培养核型分析的结果不能完全反映自然流产绒毛原代组织细胞的状态。 4.本部分实验中MLPA结合FISH是最优检测策略，能够对自然流产绒毛的原代组织细胞进行遗传分析。 第二部分运用MLPA联合FISH检测对自然流产绒毛组织进行遗传分析 【目的】 运用第一部分实验探索出的合适分子生物学方法策略——MLPA联合FISH检测，对自然流产绒毛组织进行遗传分析。 【方法】 1.在第一部分研究的基础上继续收集病例，共31例自然流产绒毛组织，16例IVF／ICSI治疗后自然流产绒毛组织，10例正常对照。自然流产组、IVF／ICSI流产组、正常对照组的患者年龄、孕周均无统计学差异。 2.细胞培养核型分析、MLPA亚端粒探针法检测、间期核FISH检测。 【结果】 1.MLPA联合FISH检测与细胞培养染色体核型分析的结果再次比较1)运用MLPA联合FISH检测了所有样本，均获得分析结果，成功率为100％(57／57)；细胞培养核型分析成功率为71.93％(41／57)，两者差异有统计学意义(P<0.001)。 2)在细胞培养失败的16例样本中，MLPA联合FISH检测发现了8例异常，包括：性染色体单体2例、嵌合型性染色体单体1例，嵌合型多倍体1例、嵌合型14三体1例、22三体1例、嵌合型22三体1例、嵌合型7q部分三体1例。 3)发现1例细胞培养核型分析为46,XY，而MLPA联合FISH检测提示6号染色体三体/二体嵌合90％／10％)。 2.三组患者绒毛组织遗传分析异常率 1)自然流产组、IVF／ICSI流产组、正常对照组的绒毛遗传分析异常率分别为61.29％(19／31)、56.25％(9／16)、10％(1／10)。两组流产患者遗传分析异常率无统计学差异(P=0.739)，但均明显高于正常对照组(P=0.023、0.014)。 2)复发性流产组与非复发性流产组患者流产绒毛遗传分析异常率分别为75％(15／20)、36.36％(4／11)，差异有统计学意义(P=0.042)。 3)遗传分析中，5例第一次自然流产的病例，2例异常(占40％)；6例第二次自然流产的病例，2例异常(占33.33％)； 16例第三次自然流产的病例，11例异常(占68.75％)；4例三次自然流产以上的病例，全部发生了异常。 【结论】 1.MLPA联合FISH检测能了解自然流产绒毛组织细胞未培养前的遗传状态，减少了培养过程中的细胞变异或母源性细胞污染导致的误差。 2.自然流产绒毛遗传分析异常率为61.29％，IVF／ICSI后流产绒毛遗传分析异常率为56.25％，两者差异无统计学意义。 3.复发性流产比非复发性流产患者的流产绒毛遗传分析异常率高，且差异有统计学意义。