雷公藤甲素对人脐带间充质干细胞生物学功能的影响研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiaxiaoli00
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目的:探讨雷公藤甲素对人血小板裂解液(platelet lysate,PL)培养的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord matrix stem cell,hUC-MSCs)生物学特性及免疫学功能的影响。为临床应用hUC-MSCs治疗免疫系统相关疾病提供实验数据及理论基础。  方法:  1、采集健康人新鲜血小板,通过离心分离得到富血小板血浆,反复冻融裂解制备血小板裂解液,制成5%血小板裂解液完全培养基。  2、组织块贴壁法原代分离培养hUC-MSCs。  3、采用倒置显微镜观察hUC-MSCs的形态并拍照记录。  4、定向体外诱导hUC-MSCs向成骨、成软骨、成脂分化,分别采用茜素红染色、阿尔新蓝染色、油红O染色,显微镜下观察hUC-MSCs的定向分化能力及染色结果并拍照记录。  5、利用CCK-8试剂盒检测不同浓度的雷公藤甲素对hUC-MSCs增殖潜能的影响。  6、应用流式细胞技术检测雷公藤甲素(3ng/mL)刺激前后hUC-MSCs表面标记CD80、CD86、CD40、CD54、CD200、CD90、CD44、CD105、CD29、CD73、CD45、HLA-DR及HLA-ABC表达变化。  7、ELISA法检测经雷公藤甲素刺激后hUC-MSCs分泌IL-10、IL-4、IL-6、IDO等的水平。  结果:  1、成功获得血小板裂解液并配制5%血小板裂解液培养基。  2、成功诱导人脐带间充质干细胞向成骨,成软骨,成脂细胞分化。  3、细胞流式技术结果显示经TPL刺激后,hUC-MSCs表面CD54表达量上升(p<0.05),CD200表达升高(p<0.05),HLA-DR表达量呈下降趋势,但无统计学意义,其余表面标记物表达情况无显著变化。  4、TPL刺激后hUC-MSCs IL-6的分泌量减少(p<0.05),IL-10、IDO分泌量增多(p<0.05)。  5、CCK-8试剂盒增殖实验结果显示,当TPL的浓度为3ng/mL时,hUC-MSCs的增殖速度最快。  结论:TPL的刺激可以影响人血小板裂解液完全培养基培养的hUC-MSCs表面CD54、CD200及HLA-DR的表达,并且可以调节hUC-MSCs因子分泌的变化。
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