【摘 要】
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研究背景和目的:以顺铂为基础的化疗是局部晚期或转移性膀胱癌患者的一线治疗方法,但在短时间内大部分患者对顺铂治疗的反应性减弱并逐渐产生耐药性。m~6A（N6-甲基腺苷）甲基化是RNA中广泛存在的修饰方式,其在调节膀胱癌顺铂化疗敏感性中的具体作用和潜在机制尚不清楚。同时,circ RNAs是否能直接介导m RNA的m~6A修饰仍不清楚。研究方法:通过Sanger测序技术和RNA FISH实验明确了ci
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研究背景和目的:以顺铂为基础的化疗是局部晚期或转移性膀胱癌患者的一线治疗方法,但在短时间内大部分患者对顺铂治疗的反应性减弱并逐渐产生耐药性。m~6A（N6-甲基腺苷）甲基化是RNA中广泛存在的修饰方式,其在调节膀胱癌顺铂化疗敏感性中的具体作用和潜在机制尚不清楚。同时,circ RNAs是否能直接介导m RNA的m~6A修饰仍不清楚。研究方法:通过Sanger测序技术和RNA FISH实验明确了circ0008399的存在,并确定其在膀胱癌中的表达水平和亚细胞定位;circ RNA pulldown分析、质谱分析和RIP实验确定了circ0008399与WTAP蛋白的相互作用;Co-IP实验和Western Blot实验用于研究circ0008399对m~6A甲基化转移酶复合体的影响;CCK-8、软琼脂平板克隆、流式细胞凋亡实验探究circ0008399/WTAP-TNFAIP3通路对膀胱癌生物学功能的影响;通过流式细胞术和回补实验探索circ0008399/WTAP-TNFAIP3轴对顺铂化疗敏感性的影响;在动物水平,异种移植瘤模型验证circ0008399/WTAP-TNFAIP3轴在膀胱癌化疗中的作用。研究结果:Circ0008399在膀胱癌组织和细胞系中高表达,且FISH实验明确了其定位在细胞核中;Circ0008399可以与膀胱癌细胞核中WTAP蛋白的101-210氨基酸区域结合;Circ0008399可以促进WTAP/METTL3/METTL14复合物的形成,进而上调膀胱癌细胞中m~6A的总体修饰水平;Circ0008399/WTAP复合物增强膀胱癌细胞中TNFAIP3m RNA的m~6A修饰进而促进其蛋白表达,且circ0008399/WTAP-TNFAIP3轴可以抑制膀胱癌的细胞凋亡;在细胞水平,circ0008399/WTAP-TNFAIP3通路能够降低膀胱癌对顺铂化疗的敏感性;动物实验证实了干扰circ0008399/WTAP-TNFAIP3轴可以促进膀胱癌顺铂化疗敏感性。研究结论:本研究首次报道circ RNA可以调控m RNA的m~6A修饰,并揭示了circ0008399/WTAP-TNFAIP3轴介导膀胱癌顺铂化疗抵抗,为膀胱癌顺铂化疗增敏提供了潜在的治疗靶点。
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