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目的：1、建立基于多重连接依赖性探针扩增(Multiple ligation probe amplification, MLPA)技术的DMD/BMD基因诊断和产前诊断技术体系。2、探讨多重PCR和MLPA技术在DMD/BMD基因诊断中的应用价值。3、应用MLPA技术确认女性携带者身份,建立可行有效的产前基因诊断体系。为患者及其家庭提供优质、快速的遗传咨询服务,减少患儿的出生。4、分析研究云南人群中DMD/BMD患者的Dystrophin基因突变谱。方法：1、对云南省第一人民医院遗传诊断中心门诊就诊的136例DMD/BMD疑诊患者,应用多重PCR法对Dystrophin基因常见缺失的18个外显子进行扩增检测。2、对有DMD/BMD家族史的15名孕妇,通过羊水穿刺获得胎儿羊水细胞,提取基因组DNA,扩增SRY基因并进行Dystrophin基因18个外显子检测,通过连锁分析DMD基因内5个杂合度较高的微卫星(STR)位点,进行Dystrophin基因的单体型分析,行产前诊断。3、对云南省第一人民医院遗传诊断中心门诊就诊的34例疑诊患者应用MLPA技术对其进行Dystrophin基因79个外显子定量检测,对于单个外显子的缺失采用PCR验证。4、应用MLPA技术对8名缺失型患者的母亲进行携带者检测,对2例高危孕妇胎儿基因组进行79个外显子检测,联合短串联重复序列多态位点(STR)连锁分析,行产前诊断。5、按缺失位点分析DMD/BMD患者的基因缺失分布情况。结果：1、136例疑似患者的Dystrophin基因经mPCR技术检测,发现其中80例为1个或多个外显子缺失,56例患者未见缺失,除去10例女性疑似患者,检出率为63.5%(80/126)。2、15例胎儿中,11例男胎,4例女胎；确诊1例DMD缺失患者,1例连锁分析为高风险男胎,9例为正常男胎；4例女胎中,1例为可疑携带者,2例为正常女胎,1例连锁分析不提供信息。3、34例疑似患者的Dystrophin基因经MLPA技术检测,发现其中16例为1个或多个外显子缺失,19例患者未见缺失及重复,除去4例女性疑似患者及其2例SMA确诊患者,检出率为57.1%,(16/28)。MLPA检出的2例单个外显子缺失(e21、e70)为多重PCR无法检出病例,占7.1%(2/28例)。4、8名缺失型患者的母亲经MLPA检测发现3名母亲为缺失型携带者,产前诊断出1例为携带者女胎,1例为正常女胎儿,与连锁分析结果吻合。5、88.7%的DMD/BMD基因缺失集中于DMD基因中央区域。结论：1、建立了基于MLPA技术的DMD/BMD基因诊断和产前诊断技术体系。2、MLPA技术可检测出患者Dystrophin基因全长外显子的缺失或重复,提高了基因检测的效率、敏感性和稳定性,单外显子缺失或峰面积比值偏低的外显子,须结合PCR,可以使结果更为精准。MLPA技术在mPCR基础上可增加7%(2/28)的检出率。3、应用MLPA技术可以对Dystrophin基因的拷贝数进行准确定量,适于携带者判定,为遗传咨询提供可靠的依据。MLPA联合短串联重复序列多态位点(STR)连锁分析,是目前进行DMD/BMD产前诊断的理想实验方法。4、云南人群中DMD基因的缺失主要集中在中央区域。