论文部分内容阅读
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是在气相色谱法和经典液相色谱法的基础上发展起来的新型分析分离技术。鉴于其快速、准确、灵敏、简便的特点,至今,己在食品工业、环境监测、生物工程、制药工业、石油化工等领域获得广泛的应用。本文由绪论和研究报告两部分组成。绪论部分简单概述了高效液相色谱法、色谱技术方面的进展、高效液相色谱在杜仲有效成分分析中的应用和大豆异黄酮的研究进展。研究报告部分建立了杜仲中绿原酸和芦丁HPLC法测定和食品中大豆异黄酮含量的HPLC法测定,包括：HPLC法测定豆奶粉中四种大豆异黄酮含量；不同豆类中四种大豆异黄酮的HPLC法测定；HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量。1.HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁建立HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁含量,并对不同产地杜仲中绿原酸和芦丁含量进行测定。采用phenomenex C18色谱柱(150 mmx4.6 mm,5μm),以甲醇-冰醋酸(pH=3.10)(45：55)为流动相洗脱,体积流量为0.8 mL/min,紫外检测波长为327 nm,采用外标法测定不同产地杜仲中绿原酸和芦丁的含量。绿原酸和芦丁分别在0.1275-24.0000μg/mL一=0.9996)、0.1250-25.0000μg/mL(rp=0.9996)线性关系良好,平均回收率分别为99.23%和97.13%,RSD分别为1.02%和2.98%。本方法简便、快速、灵敏度高、重现性好,为不同产地杜仲质量标准的进一步研究提供了科学依据。2.HPLC法测定豆奶粉中四种大豆异黄酮含量本文建立了同时测定豆奶粉中四种大豆异黄酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱法,同时对从豆奶粉中提取大豆异黄酮的工艺进行了优化。采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为：色谱柱为phenomenex C18(150mm×4.6 mm,5.0μm),采用乙腈-0.2%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm。大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素的线性范围分别是0.74-100.00μg/mL,0.74-200.00/μg/mL,0.]67～500.00 gg/mL,0.198～160.00μg/mL(r>0.9996),线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为100.01%,100.01%,99.48%,99.91%,方法简便、灵敏、准确,适用于豆奶粉中这四种大豆异黄酮成分的含量测定和产品质量控制。从豆奶粉中提取大豆异黄酮的最佳工艺为：用70%的乙醇在60℃条件下超声提取40 min。3.不同豆类中4种大豆异黄酮的HPLC法测定建立同时测定豆类中大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素四种大豆异黄酮成分含量的高效液相色谱法,色谱柱为phenomenex C18(150 mm×4.6 mm,5.0 gm),采用流动相乙腈-0.2%甲酸进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm。探讨了提取黑豆中四种大豆异黄酮的最佳条件,结果显示,70%的乙醇在60℃超声提取40 min,效果最佳。大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素的线性范围分别是0.74～100.00μg/mL,0.74～400.00μg/mL,0.167～500.00μg/mL,0.198～160.00μg/mL(r>0.9996),线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为99.81%,99.99%,99.49%,99.89%,本方法简便、灵敏、准确,适用于豆类中这四种大豆异黄酮成分的含量测定和产品质量控制。4.HPLC法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量本文建立了同时测定绿豆芽中四种大豆异酮(大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素)含量的高效液相色谱方法,对从绿豆芽中提取四种大豆异黄酮的工艺进行了优化,最佳工艺为：用60%的乙醇在55℃条件下超声提取60 min,料液比为1：12,同时探究了绿豆发芽不同天数四种大豆异黄酮的含量。采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪进行测定的色谱条件为：色谱柱为phenomenex C18(150 mmx4.6 mm,5.0μm),采用乙腈-0.2%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm。大豆苷,染料木苷,大豆苷元,染料木素的线性范围分别是0.74～100.00-μg/mL,0.74～200.00-μg/mL,0.167～500.00μg/mL,0.198-160.00μg/mL(r>0.9996),线性关系良好；加样回收率(n=9)分别为99.99%,100.01%,100.07%,99.81%,该方法简便、灵敏、准确,为日常生活中绿豆芽的最佳食用时间提供了科学依据。