shRNA干扰沉默RNPC1a基因对SUM1315细胞生物学功能的影响

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目的:研究RNA结合蛋白RNPC1a基因在亲骨性乳腺癌细胞SUM1315增殖、迁移及侵袭中的作用,并观察下调RNPC1a基因对肿瘤细胞在体内形成及生长的影响。材料和方法:运用shRNA转染技术,下调SUM1315细胞中RNPC1a基因mRNA及蛋白的表达,通过嘌呤霉素筛选出稳定细胞株,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其干涉效率,通过噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测其迁移和侵袭能力。将亲代SUM1315细胞和sh RNA-RNPC1a-SUM1315细胞接种至裸鼠皮下,观察其在体内的成瘤情况。结果:经qRT-PCR和Western blot方法证实RNPC1a干扰质粒shRNA稳定转染SUM1315细胞可有效降低细胞中RNPC1a的m RNA和蛋白水平;RNPC1a表达下调后细胞的增殖能力明显下降(P<0.05),第四天抑制率达26.5%,两周后的克隆形成率下降37.5%;同时RNPC1a干扰后细胞的迁移能力和侵袭能力均明显减弱(P<0.05)。另外,与亲代细胞相比,RNPC1a基因表达下调后,裸鼠的皮下成瘤所需时间较长,肿瘤生长速度减慢。结论:RNPC1a sh RNA能有效地降低SUM1315细胞中RNPC1a基因的表达;RNPC1a基因沉默可以抑制SUM1315细胞的增殖、迁移及侵袭,并能减缓肿瘤生长速度。
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